磷酸鹽緩沖液（pH6）：0.2 mol／L 磷酸二氫鉀溶液中加入0.2mol／L磷酸氫二鉀溶液，調節至pH6。
4．標準品
吡蚜酮：含吡蚜酮99％以上，熔點為217℃。
5．試驗溶液的制備
a 提取方法
① 谷類和豆類
將樣品粉碎，通過420μm的標準網篩后，稱取其10.0g，加入20ml水，放置2小時。
加入100mL甲醇和5ml 0.5mol／L碳酸鉀，攪拌3分鐘后，用涂布1cm厚硅藻土的濾紙抽濾于磨口減壓濃縮器中，取出濾紙上的殘留物，加入50ml甲醇，攪拌3分鐘后，按上述同樣操作，合并濾液于減壓濃縮器中，45℃以下濃縮至約5ml。
將其移入100mL分液漏斗中，用5mL水洗滌上述減壓濃縮器的茄型瓶，合并洗液于上述分液漏斗中，再用20mL正己烷洗滌上述減壓濃縮器的茄型瓶，合并洗液于分液漏斗中，緩緩振蕩1分鐘后，靜置，棄去正己烷層，水層中再加入20mL正己烷，按上述同樣操作，棄去正己烷層，在將水層移入磨口減壓濃縮器中，用少量水洗滌分液漏斗，合并濾液于減壓濃縮器中，45℃以下濃縮至約5mL，加入5mL水。
② 水果和蔬菜
水果和蔬菜：準確稱取約1 kg樣品，必要時定量加入適量水，攪切混合均勻后，稱取相當于20.0g樣品的量。
加入100mL甲醇和5mL 0.5mol／L碳酸鉀溶液（梅：3mol／L碳酸鉀溶液），攪拌3分鐘，用涂布1cm厚硅藻土的濾紙抽濾于磨口減壓濃縮器中，取沖濾紙上的殘留物，加入50ml甲醇，攪拌3分鐘后，按上述同樣操作，合并濾液于減壓濃縮器中，45℃以下濃縮至約5ml，加入5m水。
b、凈化方法
① 乙基甲硅烷基化硅膠柱和酰胺丙基甲硅烷基化硅膠柱色譜法
在乙基甲硅烷基化硅膠小柱（1000mg）(C2)中注入10mL甲醇，棄去流出液。再注入10mL水，棄去流出液。柱中注入a 提取方法所得的溶液后，注入10mL水，棄去流出液。抽濾一分鐘，除去水分。另外一根酰胺丙基甲硅烷基化硅膠小柱（500mg）(NH2)中注入10mL甲醇，棄去流出液，在酰胺丙基甲硅烷基化硅膠小柱(C2)上面連接上述的乙基甲硅烷基化硅膠小柱(NH2)，注入20mL甲醇，收集流出液于磨口減壓濃縮器中，在40℃以下除去甲醇，殘留物中加入5mL乙醇：正己烷（1：4）混合溶液溶解。
② 硅膠柱色譜法
在硅膠小柱（1000mg）(Silica)中注入10mL正已烷，棄去流出液。柱中注入①乙基甲硅烷基化硅膠柱(C2)和酰胺丙基甲硅烷基化硅膠柱(Silica)色譜法所得的溶液后，注入10mL乙醇：正已烷（1：4）混合溶液，棄去流出液，再加入20mL乙醇：正已烷（2：3）混合溶液，收集流出液于磨口減壓濃縮器中，在40℃以下除去乙醇和正已烷，殘留物中加入5mL水：甲醇（9：1）混合溶液溶解。
③ 十八烷基甲硅烷基化硅膠柱色譜法
十八烷基甲硅烷基化硅膠小柱（1000mg）(C18)中注入10mL甲醇，棄去流出液，再注入10mL水，棄去流出液。柱中注入②硅膠柱色譜法所得的溶液后，注入15mL水：甲醇（9：1）混合溶液，棄去流出液，再加入10mL水：甲醇（7：3）混合溶液，收集流出液于磨口減壓濃縮器中，在45℃以下除去水和甲醇，殘留物中加入2mL水：甲醇（4：1）混合溶液溶解，此為試驗溶液。
6、操作方法。
a 定性試驗
按下列操作條件進行試驗，試驗結果應與標準品的一致。
操作條件
柱填充劑：十八烷基甲硅烷基化硅膠（粒徑5μm）。
柱：內徑4.6mm、長250mm不銹鋼管。
柱溫：40℃
檢測器：波長298nm。
流動相：水：甲醇：磷酸鹽緩沖液（pH6）（18：5：2）的混合溶液。調整流速使吡蚜酮在10～12分鐘流出。
b 定量試驗
根據與a 定性試驗相同的試驗條件所得的試驗結果，峰高法或峰面積法定量。
c 確證試驗
按照下列操作條件，用液相色譜—質譜儀測定，試驗結果應與標準品的一致。此外，必要時用峰高法或峰面積法進行定量。
操作條件
柱填充劑：十八烷基甲硅烷基化硅膠（粒徑5μm）。
柱：內徑2.0mm、長150mm不銹鋼管。
柱溫：40℃
流動相：水：甲醇（4：1）混合溶液。調整流速使吡蚜酮在10～12分鐘流出。
7．定量限
谷類、豆類：0.01 mg/kg ，水果、蔬菜：0.005 mg/kg。
8．注意事項
吡蚜酮必須在堿性條件下進行提取。   
   

 

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