一、培養基用途：

  用于克羅諾桿菌的選擇性增菌培養。

二、原理：

  胰蛋白胨在培養基為微??生物生長提供所需的碳源、氮源、維生素、氨基酸及生長因子；氯化鈉維持滲透壓；磷酸鹽提供相對穩定的酸堿緩沖體系，月桂基磷酸鈉抑制非大腸菌群類細菌的生長

  按照GB4789.28-2024《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 培養基和試劑的質量要求》中?改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯-萬古霉素（mLST-vm）質量控制方法，與舊版國標GB4789.28-2013相比，存在一點改動，新版國標刪除了大腸埃希氏菌ATCC 259?22，將舊版國標的附錄D和附錄E合并為新版的附錄F一種質量控制方法。現按照新版國標對其進行檢測。

三、培養基成分

四、操作方法

  1?、稱取本品64.6g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，分裝錐形瓶，每瓶100ml，121℃高壓滅菌15分鐘，冷卻至45-50℃時，每100ml培養基加入過濾除菌的萬古霉素（1mg/ml）1支，混勻分裝無菌試管，每管10ml備用。

  2、制備工作菌懸液。

  3、接種

  目標菌（阪崎克羅諾桿菌ATCC 29544）：接種10CFU-100CFU/管，接種體積不超過1mL，接??種兩個平型管。同時將1mL菌懸液（與試管同一稀釋度）傾注平板（或適宜稀釋度0.1mL涂布平板）接種兩個平板，做接種量計數用。

  非目標菌（糞腸球菌ATCC ??29212）：接種1000CFU??-5000CFU/管，接種體積不超過1mL，接種兩個平型管。同時將1mL菌懸液（比待測培養基試管接種小10-100倍稀釋度）傾注平板（或適宜稀釋度0.1mL涂布平板）接種兩個平板，做接種量計數用。

圖一： mLST-vm培養基44±0.5℃培養24±2小時后

  4、44±0.5℃培養24±2小時后轉接平板。

  目標菌（阪崎克羅諾桿菌ATCC 29544）：吸取10ul培養液均勻涂布或螺旋?涂布到阪崎腸桿菌顯色平板。（注：此處與舊版國標不同，舊版國標為取10ul培養?液劃線接種至阪崎腸桿菌顯色培養基）

  非目標菌（糞腸球菌??ATCC 29212）：吸取10ul培養液均勻涂布或螺旋涂布到非選擇性平板上（如：TSA）。

  5、將轉接后的平板置于36±1℃培養24±2小時。

圖二：試管轉接平板后試驗現象

五、實驗結果

相關產品：

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相關標準：

GB4789.28-2024《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 培養基和試劑的質量要求》

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