1、菌種保藏原理
選用優良的純種,最好是休眠體(分生孢子、芽孢等),創造一個是微生物代謝不活潑,生長繁殖受抑制,難以突變的環境條件。??其環境要素是干燥、低溫、缺氧、缺營養以及添加保護劑等。
2、菌種保藏常用方法
(1)定期移植保藏法
將菌種接種于適宜的斜?面或液?體培養基,也可進行穿刺培養,待生長成健壯的菌體(對數期細胞、有性孢子或無性孢子)后,將菌種放置4℃冰箱保藏,每間隔一定時間需重新移植培養一次。芽孢桿菌每 3~6個月移種一次,其他細菌每月移種一次。此方法最早使用且至今仍普遍使用。
(2)液體石蠟保藏法
在生長良好的斜面表面覆蓋一層無菌的液體石蠟,液面高出培養基1cm,將其置試管架上以直立狀態低溫保藏。此方法是定期保藏法的補充。
(3)沙管保藏法、土壤保藏法
取河沙過24目篩。用10%-20%的鹽酸沒泡除去有機質,洗滌,烘干?,分裝入安瓿管,加塞滅菌。需要保藏的菌株先用斜面培養基培養,再用無菌水制成細胞或孢子懸液,將10滴懸液注入裝有洗凈、滅菌河沙的沙管內,使細胞或孢子吸附在沙上,放到干燥器中吸干沙中的水分,將?干燥后的沙管用火焰熔封管口。??可以室溫或低溫保藏。土壤法以土壤代替河沙,不需酸洗,經風干、粉碎、過24目篩,分裝滅菌后,同上制備。此法適用于芽孢桿菌,梭狀芽孢桿菌、放線菌和一些絲真菌的保藏。
(4)麩皮保藏法
或稱曲法保藏,將麩皮(也可用各種谷物代替)水或其他培養基成分以一定的比例拌勻,加水或培養液與麩皮的比例為1:0.8或1:1克1:1.5,原則是按照不同菌種對水分要求不同而定。將拌勻的??麩皮分裝在試管或安瓿管等容器中,裝入的麩皮應保特疏松,不要緊壓。高溫滅菌后,將隨種的孢子液接入。適宜溫度下培養,直至?長出菌絲。再放在干燥器中干燥后,20℃以下溫度保藏。也可將小管用火焰熔封。常用于放線菌和霉菌的保藏。
(5)蒸餾水保藏法
每個試管中裝5ml滅菌的無菌水,用接種針從斜面或平板上挑取一環菌種細胞,接入蒸餾水中并使之懸浮??,試管用無菌的橡皮塞塞緊,放置10℃低溫保藏。?需用時,可從管內移出一環接到培養基上,而原來的管加塞后仍可繼續保藏。此法是??最簡單的保藏方法。
(6)冷凍干燥保藏法
將菌液在凍結狀態下升華其中水分,最后獲得干燥的菌種樣品。此方法是目前被廣泛推崇的方法。
(7)液態超低溫保藏法
將菌種懸浮封存于圓底安瓿管或塑料的液氮保存管(材料應耐受較大溫差驟然變化)內,放到-196℃~-150℃的液氮罐或液氮水箱內保藏。此方法已被公認為當前最有效的菌種長期保存技術之一,適用?范圍最廣的微生物保藏法。
(8)甘油保藏法
菌種懸浮在10%(體積分數)甘油蒸餾水,置低溫(-80~70℃)保藏。實際中,常將待保藏菌培養至對數期的培養液直接加到已滅過菌的甘油中,并使甘油的終濃度在10%~30%左右,再分裝于小離心管中,置低溫保藏。基因工程常用此法保藏。
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