1．分析目標化合物
甲硫威、甲硫威亞砜、甲硫威砜
2、儀器設備
帶柱后衍生熒光檢測器的高效液相色譜儀。
3、試劑
除下列試劑外，使用附錄2所列試劑。
發熒光液：將4.0g氫氧化鈉，300mg鄰苯二甲醛溶解在20Ml乙醇中；將18.5g硼酸和100μL 3-巰基丙酸溶于水中至1,000mL。
4．標準品
甲硫威：含甲硫威99.5％以上，熔點為121.5℃
甲硫威亞砜：含甲硫威亞砜96.5％以上，熔點為133℃～134℃。
甲硫威砜：含甲硫威砜97.5％以上，熔點為160℃～163℃。
5．試驗溶液的制備
a 提取方法
① 谷類、豆類和種子類
將樣品粉碎，過420μm的標準網篩后，稱取其10.0g，加入10mL水，放置2小時。
加入20mL丙酮，攪拌2分鐘后，加入1g 氯化鈉、30mL二氯甲烷（特級）：正已烷（1：1）混合溶液。攪拌2分鐘后，以每分鐘3000轉離心分離3分鐘，上清液移入200mL三角瓶中。沉淀中加入40 mL二氯甲烷（特級）：正已烷（1：1）混合溶液，攪拌2分鐘后，按上述同樣條件離心，合并上清液于上述三角瓶中。加入適量無水硫酸鈉，不時振搖、混合，放置15分鐘后，濾入磨口減壓濃縮器中。再用20mL二氯甲烷（特級）洗滌三角瓶，以此洗液洗滌濾紙上的殘留物，重復操作兩次，合并兩洗液于減壓濃縮器中，40℃以下濃縮至約1mL。在室溫下用氮氣吹干。
殘留物中加入20mL乙腈飽和正已烷和20mL乙腈溶解，移入100mL分液漏斗中。用振蕩器激烈振蕩5分鐘后，靜置，乙腈層移入磨口減壓濃縮器中，40℃以下濃縮至約1mL。在室溫下用氮氣流進一步吹干。殘留物中加入1mL二氯甲烷（特級）溶解。
② 水果和蔬菜
準確稱取約1kg樣品，必要時定量加入適量水，攪碎混合均勻后，稱取相當于20.0g樣品的量。
加入20mL丙酮，攪拌2分鐘后，加入30mL二氯甲烷（特級）：正已烷（1：1）混合溶液、1g 氯化鈉。攪拌2分鐘后，以每分鐘3000轉離心3分離分鐘，上清液移入200mL三角瓶中。沉淀中加入40 mL二氯甲烷（特級）：正已烷（1：1）混合溶液，攪勻2分鐘后，按上述同樣條件進行離心，合并上清液于上述三角瓶中。加入適量無水硫酸鈉，不時振搖、混合，放置15分鐘后，濾入磨口減壓濃縮器中。再用20mL二氯甲烷（特級）洗滌三角瓶，以此洗液洗滌濾紙上的殘留物，重復操作兩次，合并兩洗液于減壓濃縮器中，40℃以下濃縮至約1mL。在室溫下用氮氣流進一步吹干。殘留物中加入1mL二氯甲烷（特級）溶解。
b、凈化方法
在酰胺丙基甲硅烷化硅膠小柱（360mg）中注入10mL二氯甲烷（特級），棄去流出液。柱中加入a 提取方法所得的溶液后，注入10mL二氯甲烷（特級）：甲醇（99：1）混合溶液。收集流出液于磨口減壓濃縮器中，在40℃以下除去大部分二氯甲烷和甲醇，在室溫下用氮氣流進一步吹干。殘留物中加入0.5mL甲醇溶解，加入1.5mL稀鹽酸，充分振搖混合，用孔徑0.45μm濾膜器過濾，此為試驗溶液。
6、操作方法。
a 定性試驗
按下列操作條件進行試驗，試驗結果應與標準品的一致。
操作條件
柱填充劑：十八烷基甲硅烷基化硅膠（粒徑5μm）。
柱：內徑4.6mm、長250mm不銹鋼管。
柱溫：50℃
檢測器：激發波長340nm，熒光波長455nm。
流動相：A 5%甲醇溶液，B 80%甲醇溶液，調整流速使甲硫威約35分鐘流出。
濃度梯度：用5%甲醇溶液：80%甲醇溶液（17：3）的混合溶液送液3分鐘后，由A：B（17：3）到（0：1）運行32分鐘。再輸送80%甲醇溶液10分鐘后，輸送5%甲醇溶液：80%甲醇溶液（17：3）的混合溶液15分鐘。
水解反應槽：移動相中注入0.05mol／L氫氧化鈉溶液。保持一定的注入量。
水解反應槽溫度：90℃
熒光反應槽：移動相中注入熒光發生液。保持一定的注入量。
熒光反應槽溫度：50℃
b 定量試驗
根據與a定性試驗相同試驗條件所得的試驗結果，用峰高法或峰面積法分別對甲硫威、甲硫威亞砜和甲硫威砜進行定量，求得甲硫威、甲硫威亞砜和甲硫威砜的含量，按下式求出包括甲硫威亞砜和甲硫威砜的甲硫威含量。
甲硫威（包括甲硫威亞砜和甲硫威砜）的含量（mg/kg）=A+B×0.93+C×0.88
A：甲硫威的含量（mg/kg）
B：甲硫威亞砜的含量（mg/kg）
C：甲硫威砜的含量（mg/kg）
7．定量限
   
   

 

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