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多聚物介導法



錄入時間:2023-10-12 16:10:47 來源:青島龙8娱乐官方网站生物

聚乙二??醇(PEG)和多聚賴氨酸等是協助DNA轉移的常用多聚物,尤以PEG應用最廣。這些多聚物與二價陽離子(如M??g2+、Ca2+、Mn2+等)及DNA混合后,可在原生質體表面形成顆粒沉淀,使DNA進入細胞內。

這種方法常用于酵母細胞以及其他真菌細胞,也可用于動物細胞。??處于對?數生長期的細胞或菌絲體用消化細胞壁的酶處理變成球形體后,在適當濃度的聚乙二醇6000(PEG6000)的介導下就可將外源DNA導入受體細胞中。

將外源基因導入哺乳動物細胞還可以采用磷??酸鈣或DEAE-葡聚糖介導的轉染法。這是一種進行瞬時表達的常規方法。哺乳動物細胞能捕獲黏附在細胞表面的DNA-磷酸鈣沉淀物,并能將DNA轉入細胞中,從而實現外源基因的導入。

在實驗中,先將重組DNA同CaCl2混合制成CaCl2-DNA溶液,隨后加入磷酸鈣形成 DNA-磷酸鈣沉淀,??黏附在細胞表面,通過細胞的內吞作用進入受體細胞,??達到轉染目的。

DEAE(二乙胺?乙基葡聚糖)是一種高分子多聚陽離子材料,能促進哺乳動物細胞捕獲外源DAN分子。其作用機制可能是DEAE與DNA結合后抑制了核酸酶的活性,或DEAE與細胞結合后促進了DNA的內吞作用。

脂質體(liposome)是人工構建的由磷脂雙分子層組成的物質,成膜狀結構。在形成??脂質體時,可把用來轉染的目標DNA分子包在其中,然后??將該種脂質體與細胞接觸,就將外源DNA分子導入受體細胞。脂質體介導法的原理是:受體細胞的細胞膜表面帶負電荷,脂質體顆粒帶正電荷,利用不同電荷間引力,就可將DNA、mRNA及單鏈RNA等導入細胞內。

 

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