外源DNA分子還可以通過電穿孔法轉人?受體細胞。?所謂電穿孔法(electroporation),就是把宿主細胞置于一個外加電場中,通過電場脈沖在細胞壁上打孔, DNA分子就能夠穿過孔進入細胞。通過調節電場?強度、電脈沖頻率和用于轉化的DNA濃度,可將外源DNA分別導??入細菌或真核細胞。電穿孔法的基本原理是:
在適當的外加脈沖電場作用下,細胞膜?(其基本組成為磷脂)由于電位差太大而呈現不穩定狀態,從而產生孔隙使高分子(如DNA片段)和低分子物質得以進入細胞質內,但還不至于使細胞受到致命傷害。切斷外加電場后,被擊穿的膜孔可自行復原。電壓太低時DNA不能進入細胞膜,電壓太高時細胞將產生不可逆損傷,因此電壓應控制在??300~600V范圍內,維持時間約為20~100ms,溫度以0℃為宜。較低的溫度使穿孔修復遲緩,有利于增加 DNA進人細胞的機會。
用電穿孔法實現基因導人比CaCl2轉化法方便、轉化率高,尤其適用于酵母菌和霉菌。該法需要專門的電穿孔儀。
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