對于原核細胞,常采用轉??化將目的基因導入受體細胞。原核細胞的轉化過程就是一個攜帶基因的外源DNA分子通過與膜結合進入受體細胞、并在胞內復制和表達的過程。轉化過程包括制備感受態細胞和轉化處理。
感受態細胞(competentcells)是指?處于能攝取外界DNA分子的生理狀態的細胞。在制備感受態細胞時,應注意:
① 在最適培養條件下培養受體細胞至對數生長期,培養時一般控制受體細胞密度OD600在0.4左右;
② 制備的整個過程控制在0~4℃;
③ 為提高轉化率,常選用CaCl2溶液。
CaCl2促進轉化的機制尚不清楚,可能是CaCl2在細胞壁上打了一些孔,DNA分子就能夠從這些孔中進人細胞,這些孔隨后又被宿主細胞修復。
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