一、試驗原理與介紹
芽孢桿菌屬??細菌較大(4μm ~10μm),革蘭氏陽性菌,是嚴格需氧或兼性厭氧的有莢膜的桿菌。芽孢桿菌屬可分為以下亞群:多黏芽孢桿菌??、枯草芽孢桿菌(包括蠟樣芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌)、短芽孢桿菌和炭疽芽孢桿菌。
本培養基用于芽孢桿菌平板計數,葡萄糖為細菌生長提供碳源;氯化鉀可以維持培養基均衡的滲透壓;酵母提取物、硫酸銨為細菌生長提供氮源;磷酸鈣有利于促進細菌芽孢的快速生??成,硫酸錳、七水硫酸鎂、硫酸亞鐵提供細菌菌體生長以及芽孢生成所需的微量元素。
二、培養基配方(g/L)
葡萄糖 |
10.0 |
磷酸鈣 |
5.0 |
硫酸銨 |
0.5 |
氯化鉀 |
0.2 |
七水硫酸鎂 |
0.1 |
硫酸錳 |
0.0001 |
硫酸亞鐵 |
0.0001 |
酵母提取物 |
0.5 |
瓊脂 |
20.0 |
pH 7.0±0.2(25℃) |
三、試驗方法
1、稱取本品36??.3g,加熱溶解于1000mL蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅菌30分鐘備用。
2、制備菌種懸液,接種至芽孢桿菌培養基上。
3、放置于36℃±1℃恒溫培養箱中,需氧培養48h-72h。
四、質控要求
??接種以下質控菌株,放置36℃±1℃恒溫培養箱中,需氧培養48h-72h。菌株培養結果見圖1。
質控菌株 |
菌株編號 |
接種量(CFU) |
回收率 |
生長情況 |
其他特征 |
蠟樣芽孢桿菌 |
CMCC(B) 63303 |
20-200 |
≥70% |
+++ |
白色小菌落 |
枯草芽孢桿菌 |
CMCC(B) 63501 |
20-200 |
≥70% |
+++ |
白色小菌落 |
圖1 芽孢桿菌培養基的微生物質控結果
五、注意事項
1、該培養基中含不溶性磷酸鈣,高壓滅菌后存在白色沉淀,倒平板前需充分搖勻培養基,重懸磷酸鈣均?勻分布于培養基中,再進行倒平板操?作,以免造成平板白色背景不均勻,影響試驗結果。
2、該培養基倒板后平板整體呈白色,在試驗完畢讀取菌數時可能發生不易辨別計數的情況,可采用置于燈檢箱或打光等方式進行輔助讀??數。
3、芽孢桿菌在挑菌置于稀釋液中振蕩分散的過程中,菌苔不易散開,不易形成均勻態菌懸液,這可能導致后續?稀釋涂布結果菌數不穩定或涂布菌數不?易掌握,可以通過縮小相鄰稀釋度的稀釋倍數,進行多梯度稀釋度涂布,設立多組平行對照等方式,得到所需的涂布菌數范圍,保證試驗的有效性。
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