酶是由活細胞產生的以蛋白質為主要成分的生物催化劑,它是微生物次級代謝的產物。酶廣泛存在于一切生物體中,雖然能從動、植物體內提取到酶,但微生物細胞及其培養物是酶的最重要來源 。如今,微生物發酵已成為酶制劑的主要生產方法。特別是應用基因工程技術以后,存在于動、植物細胞中的酶都能利用微生物細胞獲得。
酶作為一種生物催化劑,因其專一性強,反應條件溫和,催化效率高等優點,而被廣泛用于食品、發酵、紡織造紙、制革、醫藥、日化、飼料和三廢處理等工業。使用酶制劑可以簡化生產工藝,減少設備和投資,降低原料消耗,提高產品質量,節約能源使用,減輕環境污染,改善勞動條件等,因而特別受到歡迎 。
目前已知有3500多種酶,150多種已得到結晶,已經商品化的酶制劑有50多種,其中最主要的有淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶和果膠酶等。
(1)淀粉酶
淀粉酶是能夠水解糖苷鍵的一類酶的總稱。它可分為a-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和異淀粉酶等。能產生淀粉酶的微生物很多,如枯草芽孢桿菌、馬鈴薯芽孢桿菌等分泌液化型淀粉酶,根霉、黑曲霉等能產生糖化型淀粉酶。
利用細菌生產a-淀粉酶是以液體深層發酵為主。采用麩皮、玉米粉、豆餅粉、米糠和玉米漿等為原料,適當補充硫酸銨、氯化銨、磷酸銨等無機氮,添加少量鎂鹽、磷酸鹽、鈣鹽等無機鹽類 。pH中性或微堿性,溫度控制在27度,通氣攪拌培養24—48h。然后再經分離(除去菌體及不溶物)、濃縮、沉淀、干燥,即可得到淀粉酶制劑的成品。
利用霉菌生產a-淀粉酶多采用固體發酵。以麩皮為主要原料,酌加米糠或豆餅的堿水浸出液以補充氮源 。pH微酸性,相對濕度90%以上,32—35度下通風培養36—48h后,立即在40度下烘干或風干,即為工業生產用的粗酶。經粉碎、浸泡、分離、濃縮、沉淀和干燥等步驟可得到淀粉酶制劑的成品,其純化方法有鹽析法、有機溶劑沉淀法、等電點沉淀法和柱層析法等。
(2)蛋白酶
蛋白酶是水解蛋白質肽鍵的酶類的總稱。以產生菌的最適pH為標準,蛋白酶通常分為酸性、中性、堿性3大類型。產酸性蛋白酶的微生物以霉菌為主,如黑曲霉、根霉、青霉等;產中性蛋白酶的主要是枯草芽孢桿菌、灰色鏈霉菌或曲霉等;產堿性蛋白酶的主要是枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌等。蛋白酶已廣泛應用于酶法皮革脫毛、絲綢脫膠精煉、加酶洗滌劑、蛋 白胨制造、毛紡原料脫脂、皮毛軟化、酶法制 明膠、醬油釀造、醫藥工業和注射用水解蛋白的制造等。
利用黑曲霉生產酸性蛋白酶的培養基的基本組成是:豆餅粉、玉米粉、魚粉(6:1:1)混合物5%,豆餅石灰水物10%,氯化銨1%,氯化鈣0.5%磷酸氫二鈉0.2%,pH5.5—6.0。
生產中性蛋白酶培養基的組成與堿性蛋白酶的相似,以葡萄糖、淀粉、飴糖、玉米粉、米糠和麩皮等作為碳源,以豆餅粉、魚粉、血粉、酵母粉、胨和玉米漿作為氮源,添加鈣離子抖,鎂離子、鋅離子、錳離子等無機鹽類 。生產中性蛋白酶的培養基為微酸性,生產堿性蛋白酶的培養基為微堿性。利用霉菌、放線菌生產蛋白酶的最適溫度為28—30度;而培養芽孢桿菌則以30—37度為最佳。通氣培養有利于產酶。發酵結束后,要測定酶的活力,對成熟的酶液適當經過熱處理,然后進行酶的提取。
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