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淺談如何抑制變形桿菌的遷徙生長

王天宇
錄入時間:2023-5-31 11:46:35 來源:青島龙8娱乐官方网站生物

  變形桿菌屬是常見的腸桿菌科細菌之一,其為革蘭氏陰性菌,有鞭毛,無莢膜,無芽孢,運動活潑。與臨床和食品檢驗較為密切的為普通變??形桿菌與奇異變形桿菌。在固體培養基表面常擴散生長,最終形成遷徙生長的現象??。

普通變形桿菌CMCC(B)49027在TSA平皿上的遷徙生長

普通變形桿菌CMCC(B)49027在TSA平皿上的遷徙生長

?  遷徙生長是指細菌在固體培養基上呈擴散性生長,形成以細菌接種部位為中心的厚薄交替,同心圓??型的層層波狀菌苔。

  因為變形桿菌的遷徙生長現象,使得在劃線分離變形桿菌的過程中,很難分離出變形桿菌的單菌落。同時,若檢測樣品污??染了變形桿菌,則很容易出現變形桿菌菌苔包圍了其他細菌單菌落,出現分離其他細菌單菌落困難的現象。

遷徙生長導致菌落分離困難

遷徙生長導致菌落分離困難


方法:

1.使用含有膽鹽的瓊脂

  含有膽鹽、脫氧膽酸鹽的培??養基可以抑制變形桿菌的遷徙生長,且膽鹽對革蘭氏陽性菌有抑制作用。適合用來分離各種革蘭氏陰性菌。常用的含膽鹽?培養基有麥康凱瓊脂、HE瓊脂、SS瓊脂等。

  普通變形桿菌和奇異變形桿菌在??HE瓊脂和SS瓊脂上形成單菌落,無遷徙生長現象。同時各種?不同的顯色反應也可以分辨變形桿菌和其他革蘭氏陰性菌。

2.在培養基中添加0.4%硼酸

  以TSA為例,在配制時向TSA中添加0.4%的硼酸,121℃滅菌?15min后倒平皿。劃線接種普通變形桿菌,奇異變形桿菌。同時劃線接種大腸桿菌??,沙門氏菌,普通變形桿菌的混合菌液。

  在36℃需氧培養18小時后,觀察結果。

  可以看出培養基添加硼酸后抑菌性很強,18小時后只有一區生長,變形桿菌可以形成單菌落。延長培養時間后,可觀察到二區三區生長,出現單菌落。但此方法需要培養?時間較長,容易導致培養基失水,且硼酸具有抑菌性,可能會使目標菌不生長。

3.含0.1%苯酚TSA

  以TSA為例,在配制時向TSA中添加0.1%的苯酚(石碳酸),121℃滅菌15min后倒平皿。劃線接種普通變??形桿菌,奇異變形桿菌。同時劃線接種大腸桿菌,沙門氏菌,普通變形桿菌的?混合菌液。

  在36℃需氧培養18小時后,觀察結果。

  觀察結果時可以發現本平皿抑菌性很強,一區微弱生長出單菌落,延長培養時間后可見二三區出現單菌落。苯酚作為抑菌成分,可能會使目標菌不生長,同時苯酚對人體具有毒性,具??有刺激性氣味。因此筆者不推薦使用此方法。

4.95%乙醇

  在普通TSA平皿表面,傾倒適量95%乙醇。在整個培養皿表?面都接觸酒精后,將酒精倒出,使用超凈工作臺吹風將平皿表面吹干。劃線接種普通變形桿菌,奇異變形桿??菌。同時劃線接種大腸桿菌,沙門氏菌,普通變形桿菌的混合菌液。

  在36℃需氧培養18小時后,觀察結果。

  可以看到此法有一定效果,但不能顯著抑制其遷徙生長,在短時間培養時,可以在三區分離出單菌落。當延長?培養時間后,變形桿菌仍會遷徙生長蔓延整個培養基表面。相對而言,本法較為簡單,也具有一定的效果,從混合接種的結果來看,對本次混合的菌種并無抑制作用。

普通變形桿菌CMCC(B)49027

普通變形桿菌CMCC(B)49027

奇異變形桿菌CMCC(B)49005

奇異變形桿菌CMCC(B)49005

5.使培養基含有10%瓊脂

  以TSA??為例,在配制時,加入10%含量的瓊脂。121℃滅菌15min后倒?平皿。劃線接種,36℃培養18h后觀察結果。

  從結果來看,變形桿菌可以形成單菌落,且延長培養也不會讓其遷徙生長。但是此法弊病較多。首先,商業培養基一般添加?1.5%的瓊脂,過高的瓊脂含量,會使得培養基硬度過大,影響菌落形態。其次,添加瓊脂過多,極易在加熱和滅菌過程中出現糊鍋的情況。且最終狀態過于粘稠,流動性很差,本次試驗倒平皿時,培養基呈蜜糖狀,很難控制倒出的培養基量。

6.調整培養基中氯化鈉含量

  在配制培養基時,可以調整培養基中的氯化鈉含量。本次試驗以無鹽TSA以及甘露醇氯化鈉瓊脂(氯化鈉含量7?.5%)為例。劃線接種36℃需氧培養18h后觀察結果。

&nb??sp; 無鹽TSA以及甘露醇氯化鈉瓊脂上,變形桿菌均不遷徙生長。在甘露醇氯化鈉瓊脂上,變形桿菌呈??針尖大小。若樣本的目標菌是金黃色葡萄球菌,變形桿菌為干擾菌,則推薦使用甘露醇氯化鈉瓊脂(或B-P瓊脂)。

  在無鹽TSA上,變形桿菌菌落較甘露醇氯化鈉瓊脂上大。但是現在商品化??培養基一般均添加了氯化鈉成分,若需要無鹽瓊脂,則多數情況下需要定制或自己使用原料配制,使用不方便。

7.微需氧/厭氧環境下培養

  將變形桿菌點種至TSA平皿,36℃微需氧培養18h后,觀察結果。

  在微需氧環境中,變形桿菌仍會出現遷徙生長的現象。

  將變形桿菌劃線接種TSA平皿,36℃厭氧培養18h后,觀察結果。

  在厭氧培養的條件下,普通變形桿菌仍有輕微的遷徙生長,奇異變形桿菌則無遷徙生長的現象。

奇異變形桿菌CMCC(B)49005無遷徙生長現象

奇異變形桿菌CMCC(B)49005無遷徙生長現象

普通變形桿菌CMCC(B)49027

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注:本文屬龙8娱乐官方网站生物原創,未經允許不得轉載。

 

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