一、黑曲霉簡介

  黑曲霉（A??spergillus niger）為曲霉屬真菌中一個常見種，在自然界中廣泛存在，生命力強，在馬鈴薯葡萄糖瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂上生長初期產生白?色菌絲，長大后逐漸變黃，隨著培養基內營養的不斷消耗，菌絲的頂端逐漸產生灰黑色的孢子。

二、活化方法

&?nbsp; 黑曲霉的活化可以使用沙氏葡萄糖液體/瓊脂培養基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂/馬鈴薯葡萄糖水等常用的真菌類培養基，也能在胰酪胨大豆瓊脂、營養瓊脂等細菌培養基上生長，而實驗室?培養黑曲霉通常需要用到孢子進行各種測試，一般建議使用固體培養基（SDA或PDA）進行活化。

  注：若需要用到黑曲霉的孢子，?通常需培養至較長時間（一般為5-7天左右）可產生豐富的孢子，選擇較低營養的培養基有時候可以更快獲得孢子，培養時還需注意保持良好的透氣性，有助于霉菌的快速生長和孢子的產生?。

培養初期，黑曲霉產生白色菌絲，向周圍擴散生長

培養時間延長，培養基內營養逐漸被耗盡，菌絲顏色開始變黃色，并開始產生少量孢子

產孢子量逐漸增加

培養結束后，菌絲頂端產生大量黑色孢子

三、實驗室常用保存方法

  1.斜面保存法

  將SD??????????????????????????A或PDA制成斜面管，接種黑曲霉后培養至產生豐富孢子，置于2-8℃可保存3-6個月或更長時間，若在表面覆蓋無菌液體石蠟隔絕空氣和減少水分蒸發，保存時間可延長至一年以上。

  2.甘油冷凍保存法

  可將黑曲霉的孢子懸液加入至甘油保存管中?（甘油濃度通常為20%左右，也可使用商品化的液體菌種保存管），置于-70℃以下冷凍保?存，一般可穩定保存兩年至數年。

  3.瓷珠菌種保存法

  將黑曲霉的孢子轉??移至瓷珠菌種保存管中，上下顛倒數次，舍棄管內液體，將瓷珠冷凍保存與-20℃或-70℃以下冰箱或液氮罐中，可長期存活（一般在-20℃至少存活一年以上，在-70℃至少存活兩年?以上）。

  注：黑曲霉的活化和保存通常使用孢子部分。在進行轉接培養時，一般需挑取黑曲霉的孢子體??轉接至另一培養基中進行培養，進行甘油或瓷珠冷凍保存時，也應保存黑曲霉的孢子體。

四、孢子懸液的制作

  在進行培養基的靈敏度檢驗或者做一些霉菌殺滅效果試驗時，通常需要用到黑曲霉??的孢子懸液。可將沙氏葡萄糖瓊脂或馬鈴薯葡萄糖瓊脂制成斜面培養基（如需要得到大量孢子懸液，可使用錐形瓶制大斜面），接種黑曲霉，培養至產生豐富的孢子，加入一定體積的洗脫液（可用??生理鹽水、0.1%蛋白胨水、磷酸鹽緩沖液等）對斜面進行沖洗，得到高濃度的混懸液，將混懸液通過無菌棉花或紗布進行過濾，除去懸液中可能混入的菌絲體，便可得到孢子懸液。制備好的孢子懸液可放置于2-8℃，在驗證過的有效期內保存及使用。

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