一、試驗原理
本培養基用于致瀉大腸埃希氏菌產毒培養,致瀉性大腸埃希氏菌分為:產腸毒?素性大腸埃希氏菌(ETEC)、腸道侵襲性大腸埃希氏菌(EIEC)、?腸道致病性大腸埃希氏菌(EPEC)、腸集聚性黏附性大腸埃希氏菌(EAEC)和腸出血性大腸埃希氏菌(EHEC)5種。
酪蛋白胨、酵母浸粉提供氮源、維生素和生長因子;氯化鈉維持細菌平衡的滲透壓;磷酸?氫二鉀具有緩沖作用;葡萄糖為可發酵糖類;硫酸鎂促進微生物生長發育;氯化鐵、氯化鈷?能促進微生物毒素的產生;林可霉素(潔霉素)用于抑制厭氧菌和革蘭陽性球菌生長,對革蘭陰性菌以及真菌無活性。
二、培養基配方(g/L)
酪蛋白胨 |
20.0 |
酵母浸粉 |
10.0 |
氯化鈉 |
2.5 |
磷酸氫二鉀 |
15.0 |
葡萄糖 |
5.0 |
硫酸鎂 |
0.025 |
氯化鐵 |
0.0025 |
氯化鈷 |
0.01 |
pH 7.5±0.1(25℃) |
三、試驗方法
1、稱取本品52.54g,加熱溶解于1?000mL蒸餾水中,121??℃高壓滅菌15分鐘,待冷卻至45℃-50℃左右時,加入過濾除菌的林可霉素溶液(90μg/mL),混勻備用。
2、制備菌種懸液,接種至Honda氏產毒肉湯中。
3、放置于36℃±1℃恒溫培養箱中,需氧培養18h-24h。
四、質控結果
接種以下質控菌株,放置36℃±1??℃恒溫培養箱?中,需氧培養18h-24h。菌株培養結果見圖1。
質控菌株 |
菌株編號 |
接種量(CFU) |
生長情況 |
其他特征 |
大腸埃希氏菌 |
ATCC 8739 |
10-100 |
+++ |
渾濁 |
大腸埃希氏菌 |
ATCC 25922 |
10-100 |
+++ |
渾濁 |
圖1 Honda氏產毒肉湯的微生物質控結果
五、注意事項
1、培養基中含少量硫酸鎂、氯化鈷、氯化鐵,滅菌后可能出現微量沉淀。
2、?林可霉素屬?于林可酰胺類抗生素,121℃高溫易產生分解影響其功效,故采用過濾除菌方式在Honda氏產毒肉湯高壓滅菌冷卻后加入,務必避免一同高壓滅菌。
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