一、支原體簡介

  支原體結構簡單，缺乏細胞壁，僅有質膜，胞體內有核蛋白體以及一個由環形雙鏈DNA分子組成的原核。大小僅有0.1~0.3μm，最小直徑約為100毫微米，可通過濾?菌器，會干擾細胞培養等工作的進行。由于能?形成絲狀與分枝形狀，故稱為支原體。

  不同支原體利用的能源物質不同，如發酵葡萄糖?的肺炎支原體、人型支原體等，水解精氨酸的口腔支原體等，還有利用尿素作為能源的解脲支原體?。可利用發酵葡萄糖、水解精氨酸、水解尿素等生化反應鑒別支原體。

&nb??sp; 支原體營養要求一般比細菌高，除必須的基礎營養物質外，還需添加10%~20%的動物血清以提供支原體所需的膽固醇。由于大多數的支原體兼性厭氧，有些菌株在活化分離時保持5%~10%二氧化碳環境生長狀態更好。解脲支原體在厭氧條件下生長更好。

  支原體無細胞壁，對滲透壓敏感，對抑制細胞壁合??成的抗生素不敏感，因此可添加青霉素抑制細菌的生長。由于滲透壓突變會導致支原體破裂死亡，因此培養支原體時，維持適宜的滲透壓顯得格外重要。此外，在支原體培養中，pH也是重要因素。

二、肺炎支原體檢驗依據及培養基原理

  支原體檢查法在2020年版《中華人民共和國藥典》中體現，要求使用支原體肉湯培養基培養監測肺炎支原體。具體操作要求為：將肺炎支原體稀釋至10^-7~10^-9，接種在支原體肉湯培養基中，每個稀釋度接種3支試管，置于36℃培養7-14天，觀察培養基變色結果。肺炎支原體可以發酵培養基中的葡萄糖，使培養基的pH值降低，遇指?示劑酚紅使培養基變黃。

  豬胃消化粉、牛肉浸粉、酵母浸粉提供碳氮源、維生素和生長因子；葡??萄糖?為可發酵的糖類；氯化鈉維持滲透壓；酚紅為指示劑。

三、培養基配方（g/L）

四、試驗方法

  1、稱取本品27.52g，加熱溶解于800mL蒸餾水中，121℃高壓滅菌15分鐘，冷至室溫，無菌操作加入滅活小牛血清或馬血清200mL和青霉素80萬單位，混勻，分裝?無菌試管，備用。

  2、制備質控菌株，接種到培養基中，并梯度稀釋至-9，并做空白對照。

  3、放置于36℃±1℃恒溫培養箱中，需氧培養7-14天。

五、試驗注意事項

  1、若使用非一次性試管?等容器進行試驗，容器使用前應使用蒸餾水沖洗干凈，確保無洗滌液等殘留物，以免增加試驗的不確定性或污染。

  2、滅菌結束后，試管口會有水珠，在進行梯度稀釋時，水珠很容易與空氣中的細菌接觸以致污染，因此，試管口應灼燒至干燥，膠塞也需?過火，振蕩操作后，若培養基接觸到膠塞，還需再次進行灼燒管口。

  3、調節pH時，使用的酸堿試劑均應是滅菌后的。

  4、支原體培養前應使用封口膜封口，可提供微需氧環境以及降低污染的風險。

六、質控結果

  接種以下質控菌株，放置于36℃?±1℃恒溫培養箱中，需氧培養7~14天。培養至12天的試驗結果如圖1所示。

圖1 支原體肉湯培養肺炎支原體12天的靈敏度

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