一、配制培養基時的注意事項

  1.培養基在滅菌前，需進行加熱溶解（含瓊脂的培養基需煮沸4-6??次至瓊脂完全溶解），再進行分裝滅菌（應不超過1000mL）；

  2.含瓊脂培養基，若滅菌前未進行加熱溶解，滅菌后需充分搖勻使用；

  3.所有培養基不宜滅菌過度和長時間保溫，特別是含糖量高的培養基?，如沙氏葡萄糖瓊脂，滅菌過度或保溫時間過長易使葡萄糖發生焦化，滅菌后的培養基顏色會變深，pH會下降，此外?還會使蛋白胨中的維生素分解，降低培養基的營養；

  4.需另加添加劑的培養基通常在培養基冷卻至50℃左右時加入，?已加入添加劑的瓊脂類培養基不可熔化再次使用；

  5.配制好的培養基需及時滅菌，不可久置；

  6.培養基不可重復滅菌；

  7.瓊脂培養基不可反復熔化使用；待用的瓊脂培養基可置47-50℃水浴保?溫或50-60℃烘箱保溫，一般不可超過4小時。

  8.使用蒸餾水或純化?水配制。飲用水或自來水中由于含礦物鹽離子，配制培養基會產生渾濁現象。

  9.容器不易過滿，容量至少應比培養基體積大20%。

二、配制過程中的常見問題分析

  1、培養基顏色不正確

  （?1）含有酸堿指示劑的培養基，若顏?色不正確，通常是由于pH不正確導致的，加熱過度、錯誤的滅菌方式等都會導致此項問題。

  （2）加熱過度導致某些成分分??解或糖焦化，如SC培養基加熱過度會變紅，含糖?量高的培養基，加熱過度通常會出現顏色加深，呈焦糖色或棕褐色。

  （3）某些成分變質，如血液久置易變黑，制成的平板顏色偏棕黑色。

  2、培養基不凝固或凝固性差

  （1）稱量錯誤

  （2）瓊脂分布不均勻

  （3）培養基pH不正確

  （4）加熱過度

  （5）瓊脂量不足

滅菌前未加熱溶解，滅菌后未充分搖勻，

會出現分層現象，瓊脂凝固在底層，上層不凝固

  3、培養基產生沉淀

  （1）某些培養基原本就含有不溶性沉淀，如TTB，MC培養基等，配方中含有大?量不溶性碳?酸鈣。

 ??; （2）滅菌前未充分溶解，如Fraser培養基中?含有大量磷酸鹽，若滅菌前溶解不充足，滅菌后就會出現大量沉淀。

  （3）pH不正確，偏酸或偏堿都有可能使培養基中的部分金屬離子產生沉淀。

  （4）水的純度不夠，天然水??中含有較多的礦物鹽離子，若未除凈，則易與培養基中的磷酸鹽反應生成沉淀。

 ?? （5）添加劑加入溫度不正確，卵黃、血液等對溫度敏感的添加成分，若加入時溫度過高或溫差過大，?易出現凝塊。

  （6）稱量錯誤。

  （7）試劑加入順序不正確。

  4、培養基污染

  （1）滅菌方式不正確，導致滅菌不徹底

  （2）滅菌鍋的滅菌效力不達標

  （3）滅菌量過多，滅菌前未加熱溶解

  （4）培養基本身含耐熱菌較多

  （5）滅菌過程中，滅菌鍋內冷空氣未排干凈

  （6）滅菌鍋放置過滿

  （7）操作過程發生污染

  （8）分裝培養基器皿滅菌不充分

  （9）濾膜破損

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