1 檢驗程序

  嬰幼兒配方奶粉中嗜熱菌的檢驗程序見圖1。

圖1 嗜熱菌的檢驗程序

2 操作步驟

  2.1 樣品的稀釋

  2.1.1 稱取25g樣品置于盛有225mL無菌磷酸鹽緩沖液或無菌生理鹽水的無菌均質杯內，8000r/mi?n～1?0000r/min均質1min～2min，或放入盛有225mL稀釋液的無菌均質袋中，用拍擊式均質器拍打1min～2min，制成1:10的樣品勻液。

  2.1.2 用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1mL，沿管壁緩慢注于盛有9?mL稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支無菌吸管或吸頭反復吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。

  2.1.3 按2.??1.2操作，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1mL無菌吸管或吸頭。

 ?? 2.1.4 根據對樣品污染狀況的估計，選擇2個～3個適宜稀釋度的樣品勻液，在進行10倍遞增稀釋時，吸取1mL樣品勻液于無菌培養皿內，每個稀釋度做兩個培養皿。同時，分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個無菌培養皿內作空白對照。

  2.1.5及時將15mL～20mL冷卻至46℃～5?0℃的MPC培養基（可放置于48℃±2℃恒溫裝置中保溫）傾注培養皿，并轉動培養皿使其混合均??勻。

  2.2 培養

  水平放置待瓊脂凝固后，將平板翻轉，55℃±1℃培養48h ??± 2h，培養過程中注意防止平板干裂。

  2.3 菌落計數

  2.3.1 可用肉??眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計數器,記錄稀釋倍數和相應的菌落數量。菌落計數以菌落形成單位(colony forming unit，CFU)表示。

  2.3.2 ??選取菌落數在30CFU～300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計嗜熱菌數。低于30CFU?的平板記錄具體菌落數，大于300CFU的可記錄為多不可計。

3 嗜熱菌的計算方法

  3.1 若只有一個稀釋度平板上的菌落數在適宜計數范圍內，計算兩個平板菌落數的平均值，再將平均值乘以相應稀釋倍數，作為每g樣品中嗜?熱菌結果。

  3.2 若有兩個連續稀釋度的平板菌落數在適宜計數范圍內時，按式（1）計算：

  式中:

  N ——樣品中嗜落菌菌落數；

  Σ^C——平板(含適宜范圍菌落數的平板)菌落數之和；

  n₁——第一稀釋度(低稀釋倍數)平板個數；

  n₂——第二稀釋度(高稀釋倍數)平板個數；

  d ——稀釋因子(第一稀釋度)。

  3.3 若所有稀釋度的平板上菌落數均大于300CFU，則對稀釋度最高的平板??進行計數，其他平?板可記錄為多不可計，結果按平均嗜落菌菌落數乘以最高稀釋倍數計算。

  3.4 若所有稀釋度的平板菌落數均小?于30CFU，??則應按稀釋度最低的平均嗜落菌菌落數乘以稀釋倍數計算。

  3.5 若所有稀釋度平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數計算。

  3.6 若所有稀釋度的平板菌落數均不在30CFU～30?0CFU之間，其中一部分小于30CFU或大于300CFU時，則以最接近30C?FU或300CFU的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。

4 結果報告

  4.1 菌落數小于100CFU時，按“四舍五入”原則修約，以整數報告。

  4.2 菌落數大于??或等于100CFU時，第3位數字采用“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數字，后面用0代替位數；也可用10的指數形式來表示，按“四舍五入”??原則修約后，采用兩位有效數字。

  4.3 若空白對照上有菌落生長，則此次檢驗結果無效。

  4.4 以CFU/g為單位報告。

附錄A培養基和試劑

  A.1 含0.1%脫脂奶粉的平板計數瓊脂(MPC)培養基 點擊查看

  A.1.1 成分

  A.1.2 制法

  將上述成分加于蒸餾水中，煮沸溶解，調節pH至7.0±0.2。分裝試管或??錐形瓶，12??1℃高壓滅菌15min。

  注1:脫脂奶粉不應含有抗生素類物質。

  注2:瓊脂用量根據其凝固程度決定。

  A.2 無菌磷酸鹽緩沖液 點擊查看

  A.2.1 成分

  貯存液：稱取34.0 g的磷酸二氫鉀溶于500mL蒸餾水中，用大約175mL的1mol/L氫氧化鈉溶液調節pH至7.2，用蒸餾水?稀釋至1000 mL后貯存于冰箱。

 ?? 稀釋液：取貯存液1.??25mL，用蒸餾水稀釋至1000mL，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15min。

  A.3 無菌生理鹽水 點擊查看

  A.3.1 成分

  稱取8.5g氯化鈉溶于1000mL蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min。

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