獲得的營養缺陷型菌株還應進一步確認其生長的所需物。菌株較少時，可用生?長譜法??，若菌株較多時，常采用組合補充培養基法。

1、生長譜法

將待測菌接到斜面擴增培養，經離心洗滌除去細胞外吸附的營養物質，再涂布在基本培養基平板，每塊平板涂布10⁵個以上的細胞。也可將待測菌與融化的固體基本?培養基混合均勻后倒入培養皿，待培養基凝固后，在平板上分區??域放置少量不同的營養物或蘸有不同營養物的無菌濾紙片并保溫培養。從每種營養物區域內該菌的生長情況，判斷對營養的需求。

測定一般應分兩階段。第一階段應確定是哪類物質的缺陷型。將濾紙分別蘸取酪素水解液(氨基酸混合液)、水溶性維生素、核酸水解液和酵母浸出汁，等距離地放入平板中。這樣形成生長譜以及由此確定營養缺陷型類別。酪素水解液、水溶性維生素、核酸水解液分別對應于氨基酸缺陷型、維生素缺陷型和堿基缺陷型??。無?論哪種類型的營養缺陷型都能在酵母浸出汁周圍生長。

第二階段應根據第一階段確定的范圍，再進一步確定是哪種具體化合物的缺陷型。如果第一階段確定是氨基酸缺陷型，那就需要確定是??哪一種??氨基酸缺陷型。

如果不是有針對性地篩選某幾種營養物的缺陷型，那需要做較多的測定，可采用組合營養物法。如已確定是15種營養物質中某一物質的缺陷型，可以將15種物質分成5組 (也可將21 種物質分6 組)。以五張濾紙分別蘸取該5個組合的混合物放在涂布受檢菌的基本培養基平板上，培?養后觀察可發現組合營養物各種生長譜的可能形式。根據生長??譜和營養物組合可以判斷菌株的營養缺陷型。

2、組合補充培養基法

若待測菌株較多，則可按上述的營養物質組合，將它們直接添加在培養基中，組成5組補充培養基，將待測的菌點種在各種補充培養基上，逐個分析各菌的缺陷類型。

也可以根據?需要，配制一組補充培養基，每一種補充培養基中只缺一種營養物。那么，所有的營養缺陷型都可用它一次性??檢測，尤其是對于多種營養物質的營養缺陷型。

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