將發酵液稀釋后涂布在固體培養基表面(即涂布法),也可將經過滅菌后冷卻至45~50℃的固體培養基與一定稀釋度和體積的菌懸液混合(即混勻澆注法),凝固后培養適當時間,測定菌落形成單位的數目。涂布法不易使菌落均勻分布,從而影響菌體計數。混勻澆注法較易使菌落均勻分布,但分布在培養基內的部分細胞所形成的菌落較小,甚至無法形成菌落,這會影響菌體計數。所以兩種方法各有利弊,可酌情選用。不同菌種的菌落大小不同,一般應將樣品中的菌濃度控制在9cm培養皿中能生長50~500個CFU為佳。通常是先將待測樣品??作一系列稀釋,每個稀釋度在三個以上的平皿中培體積的離心管養生成菌落,取其平均值,根據合適的稀釋度的平皿菌落數進行含菌量計算。
平皿菌落計數法可以反映樣品中活菌的數量。該法要??求菌體呈分散狀態,否則單個菌落未必就是單個細胞形成的,所以,它較適合于細菌和酵母菌等單細胞微生物計數,不適于霉菌等多細胞微生物。如果培養基或培養條件不恰當,有些細胞也不能形成菌落,從而影響細胞計數。一個細胞一般要傳25代,才會形成肉眼容易看到的菌落。也有人將培養基放在固定于載玻片上的小環中,將細胞接種到這種微型平板上,經短時間培養后,將它們移到顯微鏡下觀測菌落數目。與以上平皿計數法相比,它能更快地獲得結果。
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