使用商品化脫水合成培養基制備培養基時,應嚴格按照廠商提供的使用說明配制，如質量/體積、 pH、制備條件、滅菌條件﹑操作步驟等。當使用獨立成分制備培養基時，按配方準確配制﹐記錄所有配制步驟。另外,記錄所有使用成分的特性(如代號和批號等)。

(1)水

  配制培養基應使用蒸餾水或相同質量的水,以排除測試條件下抑制或影響微生物生長的物質。如果蒸餾水時用氯消毒的水制備的，在蒸餾前應先對氯進行中和。盛放蒸餾水的容?器最好是由中性材料制成的（如中性玻璃,聚乙烯等),在初次使用前要確認容器中不含有任何抑制因子。

  如果是商業飲用水或城市供應生活用水,因其水質已經符合GB 19298—2014《食品安全國家標準 包裝飲用水》或 GB 5749-2006《生活飲用水衛生標準》,實驗室需要確保實驗用水符合GB 4789.28-2013 中 3.3.2的規定,即其電導率在25℃時不應超過25μS/cm(相當于電阻率≥0.4MΩ·cm) ,除非另有規定要求。水的微生物污染不應超過10³CFU/mL。應按GB4789.2,采用平板計數瓊脂培養基,在36℃±1℃培養48h±2h進行定期檢查微生物污染。

  反之,實驗室需要首先證明培養基制備用水符合GB 19298-2014《食品安全國家標準 包裝飲用水》、GB 5749-2006《生活飲用水衛生標準》或GB/T 27405-2008《實驗室質量控制規范 食品微生物檢測》,適用前還得符合GB 4789.28-2013中 3.3.2的規定。

(2)稱量和復水

  稱量所需量的脫水培養基(注意緩慢操作,必要時佩戴口罩或在通風柜中操作,以防吸入含有有毒物質的培養基粉末),先加入少量的水,充分混合(注意避免培養基結塊),然后再加水至所需的量。

(3)溶解和分裝

  脫水培養基加水后適當加熱,并不停攪拌使其快速溶解,必要時,重新溶解。含瓊脂的培養基在加熱前應先浸泡幾分鐘。?由個別成分制備的培養基應將不同成分分別加入適量的水中,并充分溶解,然后再加水至所需的量。

(4)pH的測定和調整

  用pH計測pH,必要時進行調。在實驗室用個別成分制備的培養基,除特殊說明外，培養基滅菌并冷卻到25℃時，培養基的pH變化不應超過0.2。一般使用大約濃度為40g/L(約lmol/L )的NaOH溶液或濃度約為36.5g/L（約lmol/L）的鹽酸溶液進行培養基pH的調整。值得注意的是，商品化的培養基在高壓滅菌前后的pH可能變化很大,但使用質量好的蒸餾水或去離子水配置時，滅菌前不需要調節pH。

(5)分裝

  將配制好的培養基分裝到適當的容器中,根據不同用途,谷益的體枳可為培養基體積的1倍、2倍或3倍。

(6)滅菌

  培養基和試劑的滅菌通常采用濕熱滅菌或過濾滅菌。但有些特殊培養基(如嗜鹽瓊脂培養基,MKTTn,科瑪嘉弧菌顯色培養基等)只能煮沸滅菌。煮沸后應迅速冷卻﹐避光保存;明膠,血清、糖類等不耐高溫的物質,應采取高壓鍋低溫滅菌法/間歇滅菌法滅菌;有些試劑不需滅菌，可以直接使用(參見相關國際標準或供應商使用說明)。

  濕熱滅菌通常在高壓鍋或制備培養基的容器中進行，一般高壓滅菌采用用121℃滅菌15min。當培養基體積超過1000mL時,要對滅菌條件進行適當的調整,但應按照國際標準或使用說明的規定進行。高壓滅菌條件要通過放置測試條或熱電耦進行監測,以保證滅菌的質量。滅菌效果的控制是關鍵。加熱后采用適當的方法冷卻,以防加熱過度﹐這對于腸道菌培養基(如EC、LST,GN等)和大容器中的培養基的滅菌十分重要。

  過濾除菌可在真空負壓或正壓的條件下進行,使用孔徑為0.22um 的濾膜或過濾墊,過濾前先將濾膜或過濾墊除菌,過濾器在121℃滅菌15min,可以整體滅菌也可以拆卸后滅菌,必要時在生物安全柜中無菌組裝。為達到過濾效果,操作者應事先將濾膜用無菌水潤濕。

  所有培養基濕熱或過濾滅菌后,必需進行監測,尤其是要對pH、顏色、無菌效果和均勻性等指標進行監測。

(7)添加成分的制備

  制備含有有毒物質的添加成分(尤其是抗生素)時,需要特別小心(必要時在通風柜內操作),避免因粉末的擴散造成實驗人員過敏或發生其他不良反應。制備溶液時要特別小心并按產品使用說明操作,不要使用過期的試劑。對于抗生素工作溶液,應當現用現配。在特定環境下,抗生素溶液應適量分裝后冷凍儲存，但解凍后的溶液不能再次冷凍,生產廠商應提供冷凍對抗生素活性影響的有關資料,也可由使用者自行測定。

(8)培養基配置的安全防護

  培養基產品在實驗人員看來是安全的,但是有些個別的培養基也是會有一定的危害性。一般營養類培養基的配方中含:肉浸液﹑蛋白胨類、糖類、酵母浸粉﹑氯化鈉和瓊脂等基本營養物質。此類培養基對人體基本無害,即使少量吸人也對人體無害,如營養瓊脂、平板計數瓊脂、營養肉湯、胰蛋白胨瓊脂﹑胰蛋白胨肉湯等。

  有些選擇性培養基組成成分,含有抑制非目標菌生長成分,如膽鹽、染料、抗生素、重金屬等。此類培養基對人體基本有害,即使少量吸入也對人體有害，一般皮膚接觸后需立即清洗,同時對環境也有污染。粉末狀干燥培養基對人體危害主要是粉塵吸入,粉末狀干燥培養基對環境危害主要隨意拋棄。實驗室應識別出這些危害因子,列出清單(見表5-10) ,必要時予以風險分級和防控,警示各位員工。

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