一、培養基的應用

  GMP生產車間進行沉降菌檢測時，有些環境下?會殘留抗生素類抑菌成分，污染至測沉降菌的平板上，對沉降菌的生長產生抑制效果，導致監測結果不準確。因此，對此類環境??沉降菌進行監測時，通常使用加入相應的酶類TSA平板，以消除殘留的抗生素的影響。

二、驗證方法

  進行方法驗??證之前，首先要確認沉降菌的每皿抗生素殘留量最大值為多少，驗證時可按照此最大值的120%濃度進行測試。

  例：某車間測定沉降菌時，9cm平皿測試沉降菌時，殘留的青霉素最大量為0.5mg/皿，現有含青霉素酶的TSA平皿（每皿含青霉素酶2萬單位），測定此平皿是否能消除殘留的青霉素的??影響。

  試驗方法：

  （1）選用金黃色葡萄球菌為測試菌株，活化后用生理鹽水梯度稀釋至適宜濃度；

  （2）將青霉素的標準樣品稀釋至適宜濃度，過濾除菌；

  （3）制成編號1和2含金黃色葡萄球菌濃度相同的??菌懸液（含菌量為10-100CFU/mL），2號菌懸液同時含青霉素6m??g/mL；

  （4）準備4組平板，1組為正常的TSA平板（對照組），涂布編號1的菌液0.1m??L，2組為正常的TSA平板，涂布編號2的菌液0.1mL，3組為含酶的TSA平板，涂布編號1的菌液0.1mL，4組為含酶的TSA平板，涂布編號2的菌液0.1mL，將接種后的平板置35℃培養24-48h，計數。

試驗組1（左）菌數為39CFU，實驗組2（右）無菌生長

試驗組3（左）菌數為38CFU，實驗組4（右）菌數為32CFU

  結果分析：

  1組生長良好，2組無菌生長，說明加入的抗生素是有效的，3??組與1組相比，菌數一致，說明含酶的培養基本身是合格的，沒有抑菌性，4組與1組相比，菌數基本一致（比值在0.5-2之間），說明培養基中的酶可消除0.6mg/皿的青霉素的抑菌效果。

  試驗其他結果分析及改進：

  （1）若試驗組2出現部分菌落生長，說明抗生素抑菌效果不高或者該菌對此抗生素效果?不夠敏感，可以擴大測試菌株范圍?或使用敏感菌株；

  （2?）若試驗組3的菌數比試驗組1明顯偏少，可能培養基的質??量存在問題。在確認培養基的質量沒有問題的情況下，試驗組1和3只做一組即可做為對照；

  （3）若試驗4組菌數明顯偏少或不生長，說明培養基并沒有消除抗生素的抑制效果，需加大酶??的用量或選用其他合適的酶進?行測試。

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