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ONPG生化管原理和使用方法

丁鑫鑫
錄入時間:2023-1-6 10:38:27 來源:青島龙8娱乐官方网站生物

一、試驗用途及原理:

  用于沙門氏菌和志賀氏菌、霍亂弧菌生化鑒定。

&n?bsp; 細菌分解乳糖依靠兩種酶的作用,一種是β-半乳糖苷酶滲透酶,它位于細胞膜上,可送乳糖分子滲入?細胞,另一種β-半乳糖苷酶,亦稱乳糖酶,位于細胞內,能使乳糖水解成半乳糖和葡萄糖。

  具有上述兩種酶的細菌,能在24-48h發酵乳糖,而缺乏此兩種酶的細菌,不能分解乳糖。乳糖遲緩發酵菌只??有β-半乳糖苷酶而缺乏β-半乳糖苷滲透酶,因而乳糖進入細胞很慢?,需經培養基中1%乳糖較長時間的誘導,產生相當數量的滲透酶后,才能較快分解乳糖,故呈遲緩發酵現象。

  ONPG可迅速進入細菌細胞,???被β-半乳糖苷酶水解,釋放出黃色的臨位硝基苯酚,故由培養液變黃可迅速測知β-半乳糖苷酶的存在,從而確定該菌為乳糖遲緩發酵菌。


二、培養基配方(g/L):

1%蛋白胨水

750mL

ONPG

1.5g

磷酸鹽緩沖液

250mL

pH 7.5 25℃


三、試驗方法:

  1??. 將標準儲備菌株接種到非選擇性肉湯中或采用其他制?備方法,制成5 McFarland濁度(約109CFU/ml)的菌懸液。

&??nbsp; 2. 吸取0.05-0.08ml(約1??-2滴)至生化管內,36±1℃培養24h后,觀察實驗結果。


四、結果觀察與解釋

接種以下質控菌株,36±1℃培養24h:

質控菌株

菌株編號

生長情況

其他特征

大腸埃希氏菌

ATCC25922

+++

陽性,培養基變深黃色

霍亂弧菌

/

+++

陽性,培養基變深黃色

福氏志賀氏菌

CMCC(B)51572

+++

陰性,培養基無色

宋內志賀氏菌

CMCC51592

+++

陽性,培養基變深黃色

痢疾志賀氏菌

CMCC51252

+++

陰性,培養基無色

肺炎克雷伯氏菌

CMCC46117

+++

陽性,培養基變深黃色

傷寒沙門氏菌

CMCC(B)50071

+++

陰性,培養基無色


ONPG生化管質控結果

圖1-1 ONPG生化管質控結果


五、注意事項

  本培養基僅為細菌鑒定的一部分,需做其他補充試驗。


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注:本文屬龙8娱乐官方网站生物原創,未經允許不得轉載。

 

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