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微生物的生長測定方法



錄入時間:2022-12-6 11:37:47 來源:青島龙8娱乐官方网站生物

?  描述不同種類、不同生長狀態微生物的生長情況,需要選用不同的測定指標。由于考察的角度、測定的條件和要求不同,形成了許多微生物生長測定的方法。具體如下:


一、直接法

  (1)顯微計數法

  ① 血球計數板法,將一定稀釋度的細胞懸液加到固??定體積的計數器小室內,在顯微鏡下觀測小室內細胞的個數,計算出樣品中細胞的濃度。適用于單細胞微生物的測定,不適于多細胞微生物。一般不能鑒別菌體死活。

  ② 染色計數法,預先在細胞懸液中加入染料,可分辨出死菌和活菌。

  (2)比色法或比濁法

  快速、簡單測定懸液中細胞數量??。因菌體不透光,所以在一定濃度范圍內,懸液中單細胞的數量與光密度成正比?。不適用多細胞生物的生長測定。

  (3)干重測定法

  將細胞培養液離心或過濾后,洗滌除去培養基的成分后轉移到適當的容器中,置100-105℃干燥箱烘干或低溫低壓干燥(60-80℃)至恒重后,稱??重。為避免誤差,培養液?中除細胞以外不能有固體顆粒。

  (4)菌絲長度測定法

  ① 固體培養基培養法,將真菌接種在平血的中央,??定時測定菌落??的直徑或面積。該法不能反映菌絲的縱向生長。接種量也會影響測定結果。

  ② U形管培養法,U型管底部鋪設一層培養基,??將真菌接種在U形管的一端,定時測定菌絲的長度。

  (5)細胞堆積體積測定法

  將細胞懸液裝入毛細沉淀管內,在一定條件下離心,根據堆積體積計算含菌量。或將發酵液直接裝入常用的刻度離心管內,經過一定轉速和時間的離??心,從得到沉淀的??體積推測出細胞的質量。

  (6)平皿菌落計數法

  將發酵液稀釋后涂布在固體培養基表面,或將經過滅菌后冷卻至45~50℃的固體培養基與一定稀釋度和體積的菌懸液混??合,凝固后培養適當時間,測定菌??落形成單位的數目。較適合于細菌和酵母菌等單細胞微生物計數,不適于霉菌等多細胞微生物。可反映樣品中活菌的數量。

  (7)液體稀釋法

  對未知菌樣??做連續的10倍系列稀釋。根據估計數,從最適宜的3?個連續的10倍稀釋液中各取5ml試樣,分別接種3組共15支裝有培養液的試管中(每管接入1ml)。經培養后,記錄每個稀釋度出現生長的試管數,然后查最大可能數

  (8)粒子計數器法(電阻法)

  將一電極放入一帶微孔的小管內,從小管上端抽真空,將會造成含有細胞電解液從微孔吸入管內。由于電極間有電壓,當細胞通過微孔?時,電阻增大,電阻會引起電流脈沖,脈沖數目反映了通過的粒子數。計數器吸入樣品的體積已知,可計算出細胞粒子的濃度。另外,電阻的大小與細胞大小成正比,所以脈沖強度也反映了細胞粒子的大小。


二、間接法

  (1)根據細胞組分含量進行估算

  每種細胞中核酸和蛋白質等組分的含量占有一定的比例,根據各組分的含量可間接估算出細胞含量。但在微生物細胞分批培養的不同?生長階段,細胞組成所占的比例可能有變化。

  (2)從培養基成份的消耗量來估算

  選擇一種不用于合成代謝產物的培養基成份為檢測對象,如磷酸鹽、硫酸鹽和鎂離子。從這些成分的消耗量可間接的估算出菌體的生長速度。若發酵的主要產品是菌?體本身,也可從碳源或氧的消耗來估算。

  (3)從細胞代謝產物來計算

  在有氧發酵中,CO2是細胞代謝的產物,它與微生物生長密切有關。在全自動發酵罐中大多采用紅外線氣體分析儀來測定發酵產生的CO2,進而估算出微生物的生長量。

  (4)從發酵液的黏度來估量

  隨著菌體量的增加以及黏性的發酵產物的形成,發??酵液的黏度會顯著地增大。發酵菌體裂解或染菌??等不正常情況也會造成發酵液黏度的增大或降低,從而增加估算的誤差。

  (5)從發酵的放熱量來估算

  產熱是微生物生長中的普遍現象。

  (6)以發酵液的酸堿度來估量

  在某些特定情況下,培養基pH值的變化能較好地反映底物的消耗和微生物的生長。如氨的利用結果是釋放出H+,導致pH值下降;硝酸鹽作為氮源,氫離子被從培養基中移去,導致pH值上升。

 

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