一、試驗原理：

  丁酸梭菌又叫酪酸梭菌，是一種嚴格厭氧的革蘭氏?陽性芽孢桿菌，菌體呈桿狀或稍有彎曲，周身鞭毛，能運動。酪酸梭菌是人的正常腸道菌群之一，有氧條件不生長，革蘭氏染色為陽性，能夠發酵乳糖、麥芽糖、棉籽糖、甘露醇等碳水化合物產酸，不發酵山梨醇，硝酸鹽還原試驗為陰性。

二、試驗步驟及結果

  1、將1小包丁酸梭菌活菌散溶解于含9mL無菌生理鹽水??的試管內，取1m??L菌液加入至厭氧皰肉培養基內，置于35℃恒溫箱內培養。

圖1皰肉培養基

  培養24h后，皰肉培養基渾濁，并產生大量氣泡。

  2.用接種環挑取皰肉培養基菌液劃線接種于TSA平板，放入厭氧袋內，并放入厭氧產氣包，置于35℃恒溫箱內進行厭氧培養??，另劃線接種TSA平板，置于有氧條件下35℃??恒溫箱進行培養。

圖2 TSA平板上的菌落形態

  培養24h后，有氧條件培養下?的TSA平板上無任何菌落生長，厭氧條件培養下的TSA平板細菌生長良好，菌落為白色且形狀不規則，沿接種線向周圍擴?散生長，表明該菌生長條件為嚴格厭氧，且具有較強動力。

  3.從純培養后的TSA平板上挑取菌落進行革蘭氏染色，在油鏡下觀察菌體形態。

  該菌的革蘭氏染色為陽性，顯微鏡下菌體為紫色桿狀，兩端鈍圓，部分菌體稍有彎曲。

  4.挑取TSA上純培養??的單菌落至9mL無菌生理鹽水??試管內，分別接種于乳糖、麥芽糖、棉籽糖、甘露醇、山梨醇和硝酸鹽還原生化管，置于35℃恒溫培養箱內厭氧培養。

圖4 生化反應鑒定

  培養24h后，該菌生化反應結果為乳糖陽性（變黃）、麥芽糖陽性（變黃）、棉籽糖陽性（變黃）、甘露??醇陽性（變黃）、山梨醇陰性（顏色不變）、硝酸鹽還原陰性（加試劑不變色，加鋅粒后變紅），該結果符合丁酸梭菌的典型生化反應特征。

三、注意事項

  本培養基僅為細菌鑒定的一部分，需做其他補充試驗。

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