一、克羅諾桿菌屬情況簡要介紹

??  克羅諾桿菌屬（Cronobacter）屬于腸桿菌科，革蘭氏陰性桿狀菌，（0.6～1.0）μm×（1.2～3.0）μm。不形成芽孢，無莢膜，形成周生鞭毛。需氧或兼性厭氧，最適溫度為30℃～37℃。37℃培養18h～24h菌落圓形、微凸、光滑濕潤、黃色、邊緣整齊，直徑為2mm～3mm。

??  克羅諾桿菌屬廣泛分布于自然界中，在食品、飲料、加工原料、生產環境等都能分離到該菌。克羅諾桿菌屬與散發的或小規模暴發的敗血癥、腦膜炎、大腦炎、壞死性小腸結腸炎相關。大多數感染被發現于低體重新生兒（如低于2kg）或者早產兒（即妊娠少于37周）。報道死亡率高達50%，但近年來已經降低到20%。克羅諾桿菌的傳染源目前還不清楚。但在生產奶粉和其他食品的工廠或家庭中被頻繁地檢測到。商業生產的未消毒嬰兒配方奶粉常被作為該菌暴發時的感染源。雖然嬰兒配方奶粉以外的傳染源尚未被發現，但是在環境中的傳染源可能還是存在的。

二、參考標準

  ??《GB 4789.40-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）檢驗》點擊下載

三、檢驗方法以及結果分析

  第一法克羅諾桿菌屬定性檢驗

  3.1檢驗程序

  克羅諾桿菌屬檢驗程序見圖1。

圖1 克羅諾桿菌屬檢驗程序

  3.2操作步驟

  3.2.1 前增菌和增菌

?  取檢樣100g（mL）置滅菌錐形瓶中，加入900mL已預熱至44℃的緩沖蛋白胨水，用手緩緩地搖動至充分溶解，36℃±1℃培養18h±2h。移取1mL轉種于10mL mLST-Vm（改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯-萬古霉素）肉湯，44℃±0.5℃培養24h±2h。

  質控菌株接種到mLST-Vm肉湯中，培養結果如下圖所示：

圖2 不同細菌在mLST-Vm肉湯上的生長情況

  3.2.2 分離

??  輕輕混勻mLST-Vm肉湯培養物，各取增菌培養物1環，分別劃線接種于兩個阪崎腸桿菌顯色培養基平板，顯色培養基須符合GB4789.28的要求，36℃±1℃培養24 h±2 h，或按培養基要求條件培養。

  阪崎腸桿菌劃線接種到龙8娱乐官方网站阪崎腸桿菌顯色培養基平板，培養結果如下圖所示：

圖3 阪崎腸桿菌在阪崎腸桿菌顯色培養基平板上的菌落特征

??  挑取至少5個可疑菌落，不足5個時挑取全部可疑菌落，劃線接種于TSA平板。25℃±1℃培養48h±4h。

  阪崎腸桿菌接種到TSA平板，有黃色素產生，培養結果如下圖所示：

圖4 阪崎腸桿菌在TSA平板上的菌落特征

  3.2.3 鑒定

??  自TSA平板上直接挑取黃色可疑菌落，進行生化鑒定。可選擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統。

  阪崎腸桿菌氧化酶為陰性，2min內不變色，結果如下圖所示：

圖4 阪崎腸桿菌氧化酶試驗結果

  阪崎腸桿菌接種至HBI阪崎腸桿菌生化鑒定條（GB），結果如下圖所示：

圖5 阪崎腸桿菌在HBI阪崎腸桿菌生化鑒定條（GB）上的結果

  克羅諾桿菌屬的主要生化特征見下表。

表1 克羅諾桿菌屬的主要生化特征

  3.3結果與報告

  綜合菌落形態和生化特征，報告每100 g（mL）樣品中檢出或未檢出克羅諾桿菌屬。

  第二法克羅諾桿菌屬的計數

  3.4操作步驟

  3.4.1 樣品的稀釋

??  固體和半固體樣品：無菌稱取樣品100g、10g、1g各三份，分別加入900mL、90mL、9mL已預熱至44℃的BPW，輕輕振搖使充分溶解，制成1:10樣品勻液，置36℃±1℃培養18h±2h。分別移取1mL轉種于10mL mLST-Vm肉湯，44℃±0.5℃培養24h±2h。

?  液體樣品：以無菌吸管分別取樣品100mL、10mL、1mL各三份，分別加入900mL、90mL、9mL已預熱至44℃的BPW，輕輕振搖使充分混勻，制成1:10樣品勻液，置36℃±1℃培養18h±2h。分別移取1mL轉種于10mL mLST-Vm肉湯，44℃±0.5℃培養24h±2h。

  3.4.2 分離、鑒定

  同3.2.2和3.2.3。

  3.5結果與報告

?  綜合菌落形態、生化特征，根據證實為克羅諾桿菌屬的陽性管數，查MPN檢索表，報告每100g（mL）樣品中克羅諾桿菌屬的MPN值（見下表）。

表2 克羅諾桿菌屬最可能數（MPN）檢索表

相關標準：

GB 4789.40-2016 克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）檢驗 點擊下載

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