【原理】
培養基中的牛肉浸汁,胰蛋白胨、䏡及䏡蛋白胨供給豬痢疾密螺旋體(T. I)營養,半胱氨酸為還原劑,可降低培養基的氧化還原電位,使適于T. I生長,刃天青(resazurin)為氧化還原指示劑,對T.I無毒性。它有-51mv的氧化還原電位(E′o),當E′o低至-110mv或更低時,其顏色由藍到粉紅色到完全無色,再氧化時刃天青變成粉紅色而不轉變成藍色。
【成分】
每升牛肉浸汁中的成分:
胰蛋白胨
10g
胰蛋白䏡
5g
䏡蛋白胨
5g
L半胱氨酸
0.3g
磷酸氫二鉀
1.5g
氯化鈉
2.5g
刃天青(resazurin BDH)貯存液
1ml
(溶解10mg刃天青于10ml蒸餾水內配成貯存液)
滅活胎牛血清(通過0.22μm濾膜除菌)按10%量加入
【制法】
取經濾紙過濾并于-20℃保存的牛肉浸汁,置溫水浴融化,懸浮上述各成分(除半胱氨酸及胎牛血清外)于1L牛肉浸汁內,加溫使完全溶解,然后煮沸直至指示劑退色,再稍快通入CO2遍于整個培養液中使發生氣泡,以排除培養液中的氧氣,再加入半胱氨酸,待溶解后,調至pH7.0±0.2,然后分裝于中試管中,每支9ml,塞上棉塞后,118℃滅菌15分鐘,取出后待冷至45℃左右,無菌加入除菌滅活胎牛血清1ml混勻后,馬上供接種用。
【用途】
作豬痢疾密螺旋體和無害密螺旋體的液體培養及生化鑒定用。
【注意事項】
? 1.本培養基于滅菌待冷并經加入胎牛血清后,應迅速接種密螺旋體并置厭氧罐中培養。以免放置時間過長,空氣中的氧氣侵入培養基中(可由指示劑的顏色變化觀察到,當液體表面出現粉紅色層并逐漸增厚時,說明侵入培養液中的氧逐漸増多)而影響厭氧性密螺旋體的生長。
? 2.一次用不完的培養基,則不加胎牛血清,并于滅菌后換上滅菌橡皮塞塞緊后保存。使用前再換上滅菌棉塞。如有一定量的氧氣侵入,則重新置水浴中煮沸,再通入除菌無氧二氧化碳于培養基中,使產生氣泡以排除培養基中的溶解氧后,再加入胎牛血清后使用。
3.每支培養基接種密螺旋體時,需用鉑耳刮取大量的菌苔接種3~4次,才能保證接種成功并能生長,且于接種后迅速置于含冷鈀催化劑“105”及CO2 : H2=50:50的厭氧罐中培養。
?? 4.亦可將接種密螺旋體的試管培養基換以滅菌橡皮塞,并用帶針頭的大注射器迅速抽出其中空氣經密封后,置普通溫箱培養。
5.如在本培養基中加入1%(W/V)糖類,則可作密螺旋體的發酵試驗用。
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