一、試驗簡介

  氧化酶又名細胞色素氧化酶、細胞色素氧化酶c或呼吸酶。通過氧化酶試驗可檢測細菌是否能產生該酶，主要用于腸桿菌科細?菌與假單胞菌的鑒別，前者為陰性，后者為陽性。奈瑟菌屬、莫拉菌屬細菌也呈陽性反應。

二、試驗原理

  氧化酶為細胞色素呼吸酶系統的??終末呼吸酶，氧化酶??先使細胞色素c氧化，然后此氧化型細胞色素c再使對苯二胺氧化，生成有顏色的化合物，從而表現為顏色反應。

三、試劑

  1%鹽酸四甲基對苯二胺或1%鹽酸二甲基對苯二胺。

四、試驗方法

  常用方法有以下幾種：

  （1）菌落法：直接滴加試劑于被檢菌落上。具體操作為，取37℃培養20 h的斜面培養物一支，將2～3滴試劑從斜??面??上端滴下，并將斜面略加傾斜，使試劑流經斜面上的培養物。如系平板培養物，則可將試劑滴在菌落上。

  （2）濾紙法：取一小塊潔凈濾紙，沾取少量菌，然后滴加試劑。

  （3）試劑紙片法：將濾紙片浸泡于試劑中制成試劑紙片，刮取菌苔涂于試劑紙上。

  其操作手法如圖1所示：

圖1  紙片法進行氧化酶試驗的操作手法

??  （4）拭子法：拭子應浸入試劑中，然后與可疑的分離菌落接觸，在10秒鐘內注意顏色的變化。

  （5）試管法：取18-24 h的營養肉湯（4.5mL）新鮮細菌培養物。加入試劑（0.2m?L），搖動試管，以確保混合物充分混合，觀察顏色變化。

五、試驗結果

  細菌與試劑接觸后，在10秒內呈深紫色，為強陽性；于2m??in內呈現藍色者為陽性；陽性培養物大多數于半分鐘內出現強陽性反應，2min以后出現微弱或可疑反應均判為陰性結果。

  為保證結果準確性，分別以銅綠假單胞菌和大腸埃希氏菌作陽性和陰性對照。

六、注意事項

 ?; （1）進行測試時，試劑可能會自動氧化，因此使用新鮮試劑至關重要。為保證試劑新鮮，從配制到使用不應超過一?周。

  （2）純化菌時，要選擇不含過多糖類的培養基，如營養瓊脂和胰蛋白酶大豆瓊脂。培養基中高濃度的葡萄糖會導致假陽性結果。

  （3）如果被測微生物在含有染料的培養基上生長，則結果可能會異常。

  （4）在將試劑添加到活性培養物中之前?，請先將培養物進行傳代培養，因為某些試劑會殺死微生物。

&nbs?p; （5）氧化酶測試有助于鑒定奈瑟菌以及鑒定和區分革蘭氏陰?性桿菌。為了確定被測生物的革蘭氏反應和形態，應使用革蘭氏染色進行檢查。

  （6）刮取菌苔一定要使用鉑金環、一次性塑料接種環或玻璃棒。??使用?包含鐵的環可能會導致假陽性結果。

  （7）如果所用試劑或試劑條的敏感性較低，則可能會導致假陰性結果。

  （8）試紙條上滴加無菌水時，以剛??剛浸濕為宜。若加水太多，會影響反應效果，延長反?應時間，或無顏色反應，造成假陰性（如圖2）。

左：10 u??L              右：20 uL

圖2  不同用量的無菌水對氧化酶試驗結果的影響

  （9）確保用于氧化酶測試的菌落菌齡為18至24小時。較老???的菌落，則會導致反應較弱甚至不反應（如圖3）。

左：24h菌苔       ??;     右：2??周菌苔

圖3  不同菌齡的菌苔對氧化酶試驗結果的影響

相關產品：

氧化酶試紙-點擊查看產品詳情

注:本文屬龙8娱乐官方网站生物原創,未經允許不得轉載。

上一篇：《中國藥典》對硫乙醇酸鹽流體培養基的相關規定

下一篇：兩種產氣莢膜梭菌分離培養基的對比