一、簡介

  金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是人類的一種重要病原菌，隸屬于葡萄球菌屬?（Staphylococcus），有“嗜肉菌”的別稱，是革蘭氏陽性菌的代表，可引起許多嚴重感染。可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥??、膿毒癥等全身感染。

  典型的金黃色葡萄球菌為球形，直徑0.8μm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。革蘭陽性菌，無芽孢??、無鞭毛，體外培養時一般不形成莢膜，但少數菌株的細胞壁外層可見有莢膜樣粘液物質。在某些化學物質（青霉素）作用下，可裂解或變成L型。

  金黃色葡萄球菌營養要求不高，在普通培養基上生?長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37℃，最適生長pH7.4。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑1-2mm。血平板上菌落周圍形成透明的溶血環。

  金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10%-15%NaCl肉湯中生長。耐熱性強，加熱70℃1h，80℃30min不被殺死；耐低溫，在冷凍食品中不易死亡；耐高滲，在含有50%-66%蔗糖或15%以上食鹽食品中才可被抑制，能在15%NaCl和40%膽汁中生長。金??黃色葡萄球菌具有較強的抵抗力，對磺胺類藥物敏感性低，但對青霉素?、紅霉素等高度敏感。

二、檢測要求

  食品、藥??品、化妝品等相關標準中，均要求對金黃色葡萄球菌進行檢測。通常情況下，僅要求對樣品中有無金黃色葡萄球菌進行定性判斷，但有時候也會有定量檢測的要求。有關金黃色葡萄球菌定性檢測的操作，可參考：金黃色葡萄球菌的簡單介紹 點擊查看，本文主要對金黃色葡萄球菌的定量檢測方法進行討論。

三、檢驗方法

  參考標準《GB4789.10-2016 食品安??全國家標準 ??食品微生物學檢驗 金黃色葡萄球菌檢驗》

1.平板計數法

  1.1 對于金黃色葡萄球菌含量較多的樣品，通常??采用平板計數法進行定量檢測。其檢測程序如下（圖1）：

圖1 金黃色葡萄球菌平板計數法檢驗程序

  1.2 金黃色葡萄球菌及常見菌在Baird-Parker平板上的菌落特征

  金黃色葡萄球菌在Baird-Parker平板上呈圓形，表面光滑、凸起、濕潤、菌落直徑為2mm～3mm，顏色呈灰黑色至黑色，有光澤，常有淺色（非白色）的邊緣，周圍?繞以不透明圈（沉淀），其外常有一清晰帶。當用接種針觸及菌落時具有黃油樣黏稠感。有時可見到不分解脂肪的菌株,除沒有不透明圈和清晰帶外，其他外觀基本相同。

  從長期貯存的冷凍或脫水食品中分離的菌落，其黑色常較典型菌?落淺些，且外觀可能較粗糙，質地較干燥。同屬的表皮葡萄球菌在Baird-Parker平板上，也為黑色菌落，但無渾濁帶和透明圈（如圖2）。

  在Baird-Parker平板上，普通變形桿菌為黑色圓形菌落，有渾濁帶及透明圈，渾濁帶較大；奇異變形桿菌則為褐色圓形菌落，邊緣??繞一較小的透明帶；大腸埃希氏菌則是被抑制，不能生長（如圖3）

  1.3 鑒定

  從典型菌?落中至少選?5個可疑菌落（小于5個全選）進行鑒定試驗。分別做染色鏡檢，血漿凝固酶試驗，同時劃線接種到血平板36℃±1℃培養18h～24h后觀察菌落形態，金黃色葡萄球菌菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤、金黃色（有時為白色），菌落周圍可見完全透明溶血圈。

  1.4 結果計算

  （1）若只有一個稀釋度平板的典型菌落數在20CFU～200CFU之間，計數該稀釋度平板上的典型菌落；若最低稀釋度平板的典型菌落數小于20CFU，計數該稀釋度平板上的典型菌落；若某一稀釋度平板的典型菌落數大于200CFU，但下一稀釋度平板上沒有典型菌落，計數該稀釋度平板上的典型菌落；若某一稀釋度平板的典型菌落數大于200CFU，而下一稀釋度平板上雖有典型菌落但不在20CFU～200CFU范圍內，應計數該稀釋度平板上的典型菌落，上面幾種情況得?出的菌落數，代入公式①，計算出樣品中金黃色葡萄球菌的數量，進行報告。

  公式①

 （2）若2個連續稀釋度的平板?典型菌落數均在20CFU～200CFU 之間，按公式②計算。

  公式②

2.MPN法

  2.1? ??對于含金黃色葡萄球菌菌量較多的樣品，通常MPN計數法進行定量檢測。其檢驗程序如圖4：

圖4  金黃色葡萄球菌MPN法檢驗程序

  2.2 與平板計數法相比，本方法在??樣品稀釋后增加了一個增菌??過程，其原因正是由于樣品中金黃色葡萄球菌數量較少，需要通過選擇性增菌過程讓菌數增多，再進行下一步檢測。

  該增菌過程使用了7.5%NaCl肉?湯，也是很好地利用了金黃色葡萄球菌耐高鹽的特性，在有效抑制其他雜菌的同時，讓金黃色葡萄球菌正常生長增殖。

&??nbsp; 2.3本步驟中的鑒定試驗，與平板法基本一致，包括??血平板劃線、血漿凝固試驗并借助革蘭氏染色、鏡檢等方法（具體做法和特征，均可參考金黃色葡萄球菌定性檢驗的簡單介紹 點擊查看），根據陽性管的支數查找金黃色葡萄球菌的數目進行結果報告。

四、注意事項

  在進行金黃色葡萄球菌檢驗的過程中，需要注意以下幾點：

  （1）配制Baird-Parker瓊脂基礎培養基時，一定要注意加入亞?碲酸鉀卵黃乳液時，培養基的溫度不能太高，以??免影響亞碲酸鉀的作用，或者導致卵黃絮凝。

  （2）在觀察Baird-Parker平板上的菌落特征時，一定要注意金黃色葡萄球菌具有“雙環”，即??一圈渾濁帶，外側有一透明環。只有單環渾??濁帶的一般是變形桿菌。

  （3）在進行血漿凝固試驗時要注意：可疑菌落需同時接種在5ml的BHI肉湯中和營養瓊脂上；必須使用新鮮的BHI肉湯培養物；加入BHI肉湯培養物后，要輕輕轉動瓶身至混合均勻；試驗應每半小時觀察一次，不可直接觀察第6h后的結果。一些金葡菌能夠產生蛋白酶來分解纖維??蛋白，而出現??先凝集而后消融的情況，保證每半小時觀察一次，防止因觀察不及時，而誤判成假陰性。

  （4）觀察凝固情況時?，采用將西林瓶緩慢傾斜或倒置的方式。當凝固體積??大于原體積一半，即可判為陽性。切記不要采用搖晃的方式進行觀察！

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