一、用途
本產品符合中國藥典標準,用于磺芐青霉素效價測定。
二、檢驗原理
本法是利用抗生素在瓊脂培養基內的擴散作用,抑菌圈直徑與抗生素的濃度或??活性相關;比較標準品與供試品兩者對接種的試驗菌產生抑菌圈的大小,以測定供試品效價的一種方法。
三、培養基配方(g/L)
蛋白胨 |
5.0 |
牛肉浸粉 |
3.0 |
磷酸氫二鉀 |
3.0 |
瓊脂 |
15.0 |
pH值6.5-6.6 |
25℃ |
此配方可以進行改良或增加營養成分以獲得最佳的結果
四、操作步驟
&nb?sp;1、稱取本品26.0g,加熱攪拌溶解于1000ml純化水中,116℃高壓滅菌20分鐘,備用;
2、菌懸液的制備。枯草芽孢桿菌(CMCC(B)635??01):取?枯草芽孢桿菌(CMCC(B)63501)的營養瓊脂斜面培養物,接種于盛有營養瓊脂培養基的培養瓶中,在35-37℃培養7日,用革蘭氏染色法涂片鏡檢,應有芽孢85%以上。用滅菌水將芽孢洗下,在65℃加熱30分鐘,備用;
3、取平板分別注入加熱融?化的培養基20ml,放置水平臺面上使凝固,作為底層。另取培養基適量培養基,放冷至48-50℃加入規定的試驗?菌懸液適量,搖勻。在平板中分別加入5ml,使在底層上均勻攤布,作為菌層,放置在水平臺上冷卻凝固。
4、在平板中放置牛津杯。用無菌鑷子夾住HB四連式牛津杯正面的凸點,??將其放置在菌層培養基表面上,如圖1;將壓杯板蓋上,壓住牛津杯5秒左右,使4個小杯與培養基表面緊密??接觸,防止出現縫隙導致漏液,然后小心拿走壓杯板。如圖2。
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圖1 | 圖2 |
5、在每一平板中小管中分別滴加標準品溶液,如圖3;轉移至培養箱35-37℃培養14-16小時,記錄實驗結果。如圖4。
圖3
圖4
五、微生物試驗
接種以下質控菌株,在36±1℃培養14-16小時:
質控菌株 |
菌株編號 |
接種量(CFU) |
生長情況 |
其他特征 |
枯草芽孢桿菌 |
CMCC(B)63501 |
/ |
+++ |
抑菌圈大小18mm-22mm |
抗生素檢定培養基I號(低pH)質控結果:
六、注意事項
1、注入培養基總量不大于20ml,否則放置牛津杯后平皿蓋無法蓋緊。
2、菌量濃度適宜,若菌量濃度過小,則菌層生長弱做不出抑菌圈。
3、菌層培養基表面一定要平整,否則會導致牛津杯漏液。
4、HB四連式牛津杯中央有凸點且平衡翼上標有“龙8娱乐官方网站生物”字體的為產品正面。
5、壓杯板已經輻照滅菌,可以直接使用;多次使用,可用酒精棉擦拭即可。
6、將平皿??轉移至培養箱培養過程中輕拿輕放,避免劇烈震動,不要堆置培養,以免影響實驗效果。
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