一、參考標準
《SN/T 2552.8??-2010? 乳及乳制品衛生微生物學檢驗方法 第8部分:普通變形桿菌和奇異變形桿菌檢驗》
二、生物學特性
變形桿菌為能活潑運動而又極為多形性的一群腸道菌,有球形和絲狀形,具有鞭毛、無莢膜、無芽胞、革蘭氏陰性,運動活潑??。在固體培養基上呈擴散生長,形成遷徙生長現象。
三、檢驗程序
圖1 普通變形桿菌和奇異變形桿菌檢驗程序
四、檢驗方法和結果
1、選擇性增菌
普通變形桿菌和奇異變形桿菌在GN增菌液中36℃±1℃培?養1??8-24h后生長渾濁,如圖2所示:
a:空白對照;b:普通變形桿菌;c:奇異變形桿菌
圖2 GN增菌液的培養結果
2、初步生化鑒定
①SS瓊脂試驗
取增菌?液1環,劃線接種于SS平板上,于36℃±1℃培養18-24h,普通變形桿菌和奇異變形桿菌在SS平板上的典型菌落為:1mm-2mm大小、無色半透明或有黑色中心,邊緣整齊,表面光滑的圓形菌落,如下圖所示:
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a:奇異變形桿菌 |
b:普通變形桿菌 |
②克氏雙糖培養基試驗
挑取SS平板上的可疑菌落,穿刺接種混合克氏雙糖鐵斜面,接種時先在斜面劃線,然后再穿刺到底層放入培養箱36℃±1℃培養18-24h,普通變形桿菌和奇異變形??桿菌的試驗現象為:斜面紅/底層黃(部分區域黑色),發酵葡萄糖但不發酵乳糖同時產生硫化氫和產氣,如圖3所示。
注意:能產生硫化氫的菌應及時觀察試驗結果,以免生成??的硫化鐵形成黑色區域,遮蓋斜面與底層的顏色影響判斷結果。
a:空白對照;b:普通變形桿菌;c:奇異變形桿菌
圖3 克氏雙糖的培養結果
③尿素瓊脂試驗
挑取SS平板上的可疑菌落,穿刺接?種尿素瓊脂斜面,接種時先在斜面劃線,然后再穿刺到底層放入培養箱36℃±1℃培養18-24h,普通變形桿菌和奇異變形桿菌的試驗現象為尿素培養基變玫紅,如圖4所示:
空白對照;b:普通變形桿菌;c:奇異變形桿菌
圖4 尿素培養基的培養結果
④苯丙氨酸脫氨酶培養基試驗
挑取SS平板上的可疑菌落,接種在苯丙氨酸脫氨酶培養基斜面劃線,然后放入培養箱36℃±1℃培養18-??24h,培養結束后滴加4-5滴苯丙氨酸指示劑,使其覆蓋培養基表面,1min-5min呈現綠色則為陽性,如?圖5所示:
a:空白對照;b:普通變形桿菌;c:奇異變形桿菌
圖5 苯丙氨酸脫氨酶培養基的培養結果
3、進一步的生化鑒定
符合上一步要求的可疑菌落需進一步進行其他生化試驗。
①靛基質試驗
將菌接種于胰蛋白水培養基中,放入培養箱36℃±1℃培養18-24h,滴加Kovacs氏靛基質試劑,立即觀察反應結果。普通變形桿菌為玫紅色環,為陽性;奇異變形桿菌??為黃色環,為陰性?,如圖6所示:
a:空白對照;b:奇異變形桿菌;c:普通變形桿菌;
圖6 靛基質的培養結果
②鳥氨酸脫羧酶試驗
將菌接種于鳥氨酸脫羧酶生化管中,加無菌液體石蠟覆蓋培養基液體表面,放入培養箱36℃±1℃培養18-24h,接種普通變形桿菌的培養基??呈陰性,培養??基變黃;接種奇異變形桿菌的培養基呈陽性,培養基為紫色,如圖7所示:
a:空白對照;b:奇異變形桿菌;c:普通變形桿菌
圖7 鳥氨酸脫羧酶的培養結果
③甘露醇試驗
&n??bsp; 將菌接種于鳥氨酸脫羧酶生化管中,放入培養箱36℃±1℃培養18-24??h,接種奇異變形桿菌和普通變形桿菌的培養基都呈陰性,培養基顏色為藍色或藍綠色,如圖8所示:
a:空白對照;b:奇異變形桿菌;c:普通變形桿菌
圖8 甘露醇的培養結果
④氧化酶試驗
變形桿菌氧化酶試驗不變色,為陰性,銅綠假單胞菌為陽性變藍,如圖9所示:
a:銅綠假單胞菌10104;b:奇異變形桿菌
圖9 鳥氨酸脫羧酶的培養結果
注:普通變形桿菌和奇異變形桿菌生化鑒定表如下:
生化反應 |
明膠液化 |
甘露醇 |
靛基質 |
鳥氨酸脫羧酶 |
麥芽糖 |
木糖 |
鼠李糖 |
普通變形桿菌 |
+ |
- |
+ |
- |
+ |
+ |
- |
奇異變形桿菌 |
+ |
- |
- |
+ |
- |
+ |
- |
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