一、實驗目的
為了準確評價消毒劑對微生物的滅殺作用,消毒劑試?驗中要求選擇適當中和劑,所選中和劑不僅能及時中止消毒劑的殺微生物作?用,且中和劑本身及其與消毒劑的反應產物(以下稱中和產物)尚需對微生物無抑制或滅殺作用,對培養基無不良影響。
二、實驗方法
1、用接種環挑取指示菌接入PBS中制成適量濃度的菌懸液;
2、將消毒液用滅菌蒸餾水配制成3種不同濃度,在不加中和劑??的情況下,測知消毒劑10min抑殺指示菌的最低?有效濃度;
3、取消毒劑10min抑殺指示菌的最低有效??濃度與待選擇中和劑進行試驗,選出中和劑種類并依據等當量中和原則,調整中和劑??濃度,選出試驗濃度的消毒劑使用中和劑的濃度;
4、在進行中和劑選擇試驗時,先將消毒劑1ml與中和劑溶液9m??l混合,制成中和產物溶液。
加入消毒劑混勻前
左:復方中和劑 右:生理鹽水
加入消毒劑混勻后
左:中和產物 右:生理鹽水
5、現以復方中和劑為例,按照下表所示進行試驗:
組號 |
0.5ml菌液加于 |
混勻作用10min |
取0.5ml混勻液加入 (加入后總量為5ml) |
作用10min后 取原液或者稀釋液0.5ml接種平板(2個/樣本) |
1 |
消毒液4.5ml |
PBS 4.5ml |
原液*10 |
|
2 |
消毒液4.5ml |
中和劑4.5ml |
原液*10 |
|
3 |
中和產物4.5ml |
PBS 4.5ml |
*100,*1000 |
|
4 |
PBS 4.5ml |
PBS 4.5ml |
*100,*1000 |
|
5 |
中和劑4.5ml |
PBS 4.5ml |
*100,*1000 |
|
6 |
|
|
PBS 5.0ml |
原液 |
混勻作用前
1:消毒液4.5ml 2:消毒液4.5ml 3:中和產物4.5ml 4:PBS 4.5ml 5:中和劑4.5ml
混勻作用后
1:PBS 4.5ml 2:中和劑4.5ml 3:PBS 4.5ml 4:PBS 4.5ml? 5:PBS 4.5ml 6:PBS 5.0ml
6、中和實驗結果舉例(以復方中和劑為例):
中和劑 |
各組回收菌落數(cfu/ml) |
3、4、5組間誤差率(%) |
|||||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
||
復方中和劑 |
0 |
708 |
4.67*106 |
4.83*106 |
4.11*106 |
0 |
6.27 |
三、實驗結論及判定標準
1、根據數據顯示,3、4、5組菌數相似,其誤差率小于等于10%。
2、6組無菌生長。
3、1組不長菌或者明顯少于2組。
符合上述標準的中和劑表明可消除消毒劑對指示菌的作用,中和劑及其與消毒?劑中和產物對指示菌無毒害,判定為該消毒劑的中和劑。
四、補充實驗
使用中消毒液染菌量檢查方法:
1、用移液槍按照無菌操作方法吸取1ml被檢消毒液,加入9ml中和劑混勻;
2、按照無菌操作使用移液槍吸取中和產物?1ml接種平皿,將冷至40℃??-45℃的熔化營養瓊脂培養基每皿傾注15ml-20ml,36℃恒溫箱培養72h,計數菌落。
消毒液染菌量(CFU/ml)=平均每皿菌落數*10*稀釋倍數
注意事項:醇類與酚類消毒劑用普通營養肉湯中和,含氯消毒劑、含碘消毒劑和過氧化物消毒劑用含0.1%硫代硫酸鈉中和劑,洗必泰、??季銨鹽類消毒劑用含0.3%吐溫80和0.3%卵磷脂中和劑,醛類消毒劑用含0.3%甘氨酸中和劑,含有表面活性劑的各種復方消毒劑可以在中和劑中加入吐溫80至3%。
注:本文屬龙8娱乐官方网站生物原創,未經允許不得轉載。
上一篇:影響微生物生長的主要因素