一、試驗原理:
用于細菌的革蘭氏染色試驗。
??通過結晶紫初染和碘液媒染后,在細胞壁內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合物,革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯致密,故遇乙醇或丙酮脫色處理時,因失水反而使網孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現縫隙,因此,能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內,使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差,在遇脫色劑后,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出,因此通過乙醇脫色后仍呈無色,再經沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
二、培養基配方(g/L):
革蘭氏染色液A液:
結晶紫 1.0g |
95%乙醇 |
20.0ml |
1%草酸銨水溶液 |
80.0ml |
碘 |
1.0g |
碘化鉀 |
2.0g |
蒸餾水 |
300ml |
95%乙醇 |
沙黃 |
0.25g |
95%乙醇 |
10.0ml |
蒸餾水 |
90.0ml |
三、試驗方法:
&nb??sp;??1.如果樣品來自肉湯培養物:挑取1-2環肉湯培養基至潔凈載玻片上,不需要涂布開,在空氣中自然干燥樣品液。如果樣品來?自平板培養物:用接種環挑取1環蒸餾水至潔凈載玻片上,挑取一個單菌落,與蒸餾水混合均勻,涂布于載玻片上,盡可能涂布均勻,且不要太厚,空氣中自然干燥菌液。
2.涂布經火焰固定,加(結晶紫溶液)溶液A染1分鐘,水洗。
3.加(碘液)溶液B染色1分鐘,水洗。
4.加(脫色液)溶液C,不時搖動載玻片約10-30秒,至無紫色脫落為止,水洗。
5.加(復染液)溶液D,染1分鐘,水洗。
6.干后油鏡鏡檢。革蘭氏陽性菌呈暗紫色至紫色,革蘭氏陰性菌呈紅色至淡紅色。
四、結果觀察與解釋
接種以下質控菌株:
質控菌株 |
菌株編號 |
實驗結果 |
鏡檢菌落顏色 |
金黃色葡萄球菌 |
ATCC25923 |
G+ |
紫色 |
大腸埃希氏菌 |
ATCC25922 |
G- |
紅色 |
革蘭氏染色液微生物質控結果:
五、注意事項
本培養基僅為細菌鑒定的一部分,需做其他補充試驗。
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