目的要求
1 ．學習并掌握芽孢染色法．2 ．初步了解芽孢桿菌的形態特征，
二、基本原理
芽孢又叫內生孢子，是某些細菌生長到一定階段在菌體內形成的休眠體，通常呈國形或肺圈形．細曲能否形成芽孢敘及芽孢的形狀芽孢在芽孢囊內的位t 、芽鵝班是否膨大等特征是鑒定細菌的依據之一
由于芽孢壁厚、透性低上不易著色．當用石炭酸復紅．結晶紫等進行單染色時，菌體和芽孢囊著色，而芽孢囊內的芽孢不著色或僅顯很淡的頗色，游離的芽孢呈淡紅或淡藍紫色的圈或捕圈形的圈，為了使芽孢粉色便于觀察．可用芽孢染色法。
芽孢染色法的基本原理是：用著色力強的染色荊孔雀綠或石炭酸復紅，在加熱條件下染色，使染料不僅進人藺體也可進人芽孢內，進人菌體的染料經水洗后被脫色，而芽袍一經普色難以被水洗脫，當用對比度大的友染荊染色后，芽孢仍保留初染劑的頗色，而菌體和芽孢囊被染成復染劑的顏色，使芽袍和菌體更易于區分
三、器材
1 ．菌種 蠟樣芽孢桿菌約2d 百養瓊脂斜面培養物，球形芽袍桿菌1~2d 營養瓊脂斜面培養物．
2 ．染色荊5 腸孔雀綠水溶液，0 . 5 ％番紅水溶液。
3 ．儀器或其他用具小試管．滴管，燒杯，試管架，載玻片，木夾子，顯微鏡等．
四、操作步驟
（一）改良的Schaeffer-Fulton氏染色法
1 ．制備菌懸液
加1~2 滴水于小試管中，用接種環挑取2 ~3 環菌苔于試管中，攪拌均勻，制成濃的菌懸液． 
2 染色
加孔雀綠染液2~3 滴于小試管中，并使其與菌液混合均勻，然后將試管置于沸水浴的燒杯中，加熱染色15~20 mm 。
3 涂片固定
用接種環挑取試管底部菌液數環于潔凈載玻片上，涂成薄膜，然后將涂片通過火焰3 次溫熱固定。
4 脫色
水洗．直至流出的水無綠色為止．
5 ．復染
用番紅染液染色2~3min ，傾去染液并用濾紙吸干殘液．
6 ．鏡檢
干澡后用油鏡觀察．
芽孢呈綠色，芽孢囊及營養體為紅色．
(二〕 Schaeffer-Fulton氏染色法
1 ．制片
按常規涂片、下燥、固定，
2 ．染色
加數滴孔雀綠染液于涂片上，用木夾夾住載玻片一端，在微火上加熱至染料冒燕氣并開始汁時．維持5min . 
加熱過程中及時補充染液．切勿讓涂片干涸．
3 ．水洗
待玻片冷卻后，用緩流自來水沖洗，直至流出的水無色為止。
4 ．復染
用番紅染液復染2min . 
5  水洗
用緩流水洗后，吸干，
6 ．鏡檢
干后油鏡觀察。
芽孢呈綠色，芽孢囊及營養體為紅色．
五、實驗報告
1 ．結果
繪圖表示兩種芽孢桿茵的形態特征（注意芽孢的形狀、著生位置及芽孢囊的形狀特征）. 2 ．思考題
( l ）說明芽孢染色法的原理．用簡單染色法能否觀察到細苗的芽孢？
( 2 ）用Schaefrer 一Fulton 氏染色法加熱染色時，若因一時疏忽玻片上的染液被烘千，此時能否立即補加染液？為什么？
( 3 ）若涂片中觀寮到的只是大且游離芽孢，很少看到芽孢襲及營養細胞，你認為這是什么原因？
  
   

 

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