1.方法一
(1)培養基
L-色氨酸 |
3g |
KH2PO4 |
1g |
K2HPO4 |
1g |
NaCl |
5g |
乙醇(95%) |
10ml |
蒸餾水 |
900ml |
加酚紅至微橙的黃色(25-30mg),? pH約為6.8-6.9,分裝于三角瓶中,121℃蒸氣滅菌20min。另將20g尿素溶于100ml水中,過濾滅菌,用無菌操作與上述熱滅菌的培養基相混,并分裝于無菌試管內,每管液層高約3~4cm。
&nb??sp; (2)接種與測定:將試驗菌株的幼齡培養物接種于上述培養液中,適溫培養24h,取2~4滴培養液,與1滴三氯??化鐵溶液(約33%)相混。如呈紅褐色,則為色氨酸脫氨酶陽性反應。如無顏色變化則為陰性反應。可用變形菌作為陽性對照。
(3)結果觀察:如培養后的培養液由黃色??轉紅色,表示有脲酶存在。如用對二甲基氨基苯甲醒試劑測定,可檢查有無吲哚形成。如不擬??測定脲酶,配制培養基時可不加酚紅和尿素。
2.方法二
(1)試液
L-色氨酸 |
0.%~0.5% |
生理鹽水或pH6.8緩沖液(A液與B液相混即為pH6.8的緩沖液) |
A液:KH2PO4,1/5mol/L(27.2g/L) |
50ml |
B液:NaCO3,1/5mol(8.0g/L) |
23.6ml |
FeCl3 |
33% |
(2)接種與培養
將試驗菌接種于肉汁陳斜面,適溫培養24h。
(3)測定方法
測定方法?:取干凈的試管二支,每管中加四滴L-色氨酸0.2%-0.5%溶液和四滴生理鹽水(或四滴pH6.8緩沖液A和B),然后將測定菌的菌苔混到上述溶液的二支試管中制成濃菌液。另二支試管中不加菌苔作為對照。置室溫15-20 min后,每管中加入一滴三氯化鐵(33%)溶液,立即呈現紅褐色,表示陽性反應, 不變色者表示陰性反應。可用變形菌作為陽性對照。
本文節選自《常見細菌系統鑒定手冊》第十四章。
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