1.培養基

??     每管分裝4-5 ml, 121℃蒸氣滅菌15-20 min。

2.試劑

  （1）格里斯氏(Griess）試劑

?  （2）二苯胺試劑：二苯胺0.5g溶于100 ml濃硫酸中，用20 ml蒸餾水稀釋。

3.接種

??  將測定菌接種于硝酸鹽液體培養基中，置適溫培養1,3,5天。每株菌作二個重復，另留兩管不接種作對照。

4.操作

??  取二支干凈的空試管或在比色瓷盤小窩中倒入少許培養l,3,5天的培養液，再各加一滴A液和B液，在對照管中同樣加入A液，B液各一滴。

5.結果觀察

??  當培養液中滴入A,B液后，溶液如變為粉紅色、玫瑰紅色、橙色、棕色等表示亞硝酸鹽存在，為硝酸鹽還原陽性。如無紅色出現，則可加一、二滴二苯胺試劑，此時如呈藍色反應，則表示培養液中仍有硝酸鹽，又無亞硝酸鹽反應，表示無硝酸鹽還原作用；如不呈藍色反應，表示硝酸鹽和形成的亞硝酸鹽都已還原成其他物質，故仍應按硝酸鹽還原陽性處理。

6.注意事項

??  （1）還原硝酸鹽反應是在較為厭氧條件下進行的，雖不必用礦油封液面，但分裝試管時液層不宜太薄，對生長緩慢的細菌尤應注意。

??  （2）對不同種的細菌來說，亞硝酸鹽可以是硝酸鹽還原的最終產物，也可以是整個 還原過程的中間產生，另一方面，有的種還原極為迅速，有的種還原緩慢因而第一次檢查這一項目時要及時(18-24 h)，并且對陰性反應的菌株應連續觀察。并且對千未呈現亞硝酸鹽反應的測定應檢查是否仍有硝酸鹽（二苯胺測定），然后才能判斷有無硝酸鹽的還原反應。

  本文節選自《常見細菌系統鑒定手冊》第十四章。

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