（一）光學顯微鏡下觀察法

   1.插片法 適用于觀察放線菌的自然生長狀態

   在適合菌種生長的固體培養基上，涂布接種觀察的菌株，然后用攝子把滅過菌的蓋玻片以45°角插入平板中，然后置適宜的生長溫度培養（一般一個平板可插6～?8片）。 在不同生長期取出蓋玻片，用結晶紫染lmin、水洗、干燥，在光學顯微鏡下觀察，攝像。

   2.蓋片法

   用適合菌種生長的固體培養基倒平板，涂布接種上需觀察的菌株，然后用無菌小刀在平板正中間切去1cm左右的瓊脂塊，用鑷子夾一塊無菌載玻片蓋于有溝的瓊脂平板上，置適當溫度下培養。菌株會沿玻片生長。生長好后取出載玻片，結晶紫?染色1 min、水洗、干燥。在光學顯微鏡下觀察到生長完整的氣生菌絲體，同時攝影。

（二）透射電子顯微鏡觀察法

   1.材料

   透射電鏡一臺，載樣銅網膜，火棉膠。

   2.方法

   （1）火棉膠準備：2g火棉膠溶于100 ml醋酸異戊酣中。

   （2）載樣膜的制備：先把銅網膜用濃硫酸浸漂2min,再用水洗數次，最后將洗凈的銅網膜鋪在有濾紙的培養皿中。輕輕注入無菌水，取配好的火棉膠液滴一滴在水面上，由于火棉膠在水面上的表面張力形成一薄膜，將第一、二次的膜除掉，薄膜形成后迅速??用吸管在培養皿的邊緣處吸去水分，直至吸干，使膜緊緊貼在銅網上為止，室溫干燥備用??。

&nbs??p;  （3）點樣：用生長豐茂的菌株制成菌懸液，用毛細管吸取菌液并滴在銅網上。也可以用貼印法，即用制好的銅網在有氣生菌絲體的菌塊上輕輕印一下，然后，在光學顯微鏡下先檢查一下網是否完整，及蔭是否貼上或分布均勻。然后噴碳或投影（通常用于細菌鞭毛觀察），便可在透射電子顯微鏡下觀察或攝影。

（三）掃描電鏡觀察法

   掃描電鏡可以觀察到菌體表面的立體形象?，它通過三維形象逼真地反映出樣品表面結構的凹凸不平，如細菌的形態、鞭毛結構、放線菌孢子的表面裝飾物等都以立體狀反映出來。

   1.材料

   掃描電鏡一臺，臨界點干燥器，白金粉，戊二醛，乙醇。

   2.方法

   菌株培養于適宜生長的平板培養基上-待生長好后用小刀切成0.5～0.7cm3的方塊一然后小刀削薄→置瓷染色盆中→立即加2.5％戊二醒固定1.5h→吸去戊二醛→分別加30%、50%、70%、90%、100％乙醇各脫水15min→取出放于圓形容器中→臨界點干燥1h→取出貼于一圓形銅片上→??白金濺射噴鎖，厚度約2～5mm→置掃描電鏡下觀察及攝影。

   本文節選自《常見細菌系統鑒定手冊》第十二章。

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